祝岩波，徐增年，魏世锦，郑 龙，尤红煜，孟钰榕，刘福英，梁晓亮，王俊霞*

技术方法

实验动物四种病原体多重PCR方法的建立与应用

祝岩波1，徐增年1，魏世锦2，郑 龙1，尤红煜1，孟钰榕1，刘福英1，梁晓亮3，王俊霞1*

多杀巴氏杆菌(Pasteurellamultocida)、支气管鲍特杆菌(Bordetellabronchiseptica)、支原体(Mycoplasmapneumoniae)和肺炎克雷伯杆菌(Klebsiellapneumoniae)是实验动物的常见病原微生物，能引起许多哺乳动物呼吸系统的隐性感染甚至死亡[1]。近几年实验动物质量监测结果显示，以上四种病原微生物阳性时有发生[2-4]。目前我国实验动物微生物等级及监测标准为多杀巴氏杆菌(GB/T 14926.5-2001)，支气管鲍特杆菌(GB/T 14926.6-2001)，支原体(GB/T 14926.8-2001)，肺炎克雷伯杆菌(GB/T 14926.13-2001)。上述四种病原微生物采用的检测方法是传统的分离培养和生化鉴定方法，此种方法费时费力，而且实验人员需要具备较高的专业素质，因此急需建立一种更为简便，快速的检测方法。目前分子生物学方法对于细菌、病毒的检测已得到广泛应用，四种病原微生物的单一PCR方法已有报道，但同时检测四种病原微生物的方法尚未建立[6，8-15]，本研究建立了能够同时检测上述四种病原微生物的多重PCR方法并且完成初步应用，为其快速检测和诊断提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 菌株

本实验所用肺支原体(NCTC10540)由中国食品药品检定研究院惠赠，多杀巴氏杆菌(K8123)购自温州康泰生物科技有限公司，支气管鲍特杆菌(CGMCC1.2418)购自中国微生物菌种保藏中心，肺炎克雷伯杆菌(CMCC46117)购自广东省微生物菌种保藏中心。金黄色葡萄球菌(ATCC6538)由石家庄市疾控中心惠赠。……