魏文增，黄慧玲，叶丽香， 林 菁,， 俞昌喜

钩吻素子在人和猪、大鼠、猴、犬肝微粒体的酶促动力学及CYP450酶亚型分析

魏文增1,2，黄慧玲1，叶丽香3， 林 菁1,3， 俞昌喜1

目的 研究和比较钩吻素子(KM)在人与各种实验动物肝微粒体体外代谢的酶促动力学及选择性CYP450酶抑制剂对其代谢的影响。 方法 采用优化的反应体系和UPLC检测方法，测定系列浓度的KM与各种属肝微粒体孵育的降解曲线，以底物消除法计算酶动力学参数；共孵育方法考察选择性CYP450酶抑制剂对KM在各种属肝微粒体代谢的影响。 结果 在人肝微粒体，KM的米氏常数(Km)、最大反应速率(Vmax)、半哀期(T1/2)、固有清除率(CLint)分别为(0.135±0.067)mmol/L、(1.89±0.19)μmol·min-1·g-1pro、(712±23)min和(15.7±5.2)mL·min-1·g-1pro。与人相比，犬、猪的Km值较大，大鼠及猴的CLint较高，4种实验动物的Vmax值均较大、T1/2均较短。酮康唑在各种属均可显著抑制KM代谢，在人、猪、犬IC50<1 μmol/L，在大鼠、猴IC50为1～10 μmol/L，可见CYP3A为主要代谢酶。噻氯匹定、奎尼丁和磺胺苯吡唑仅对大鼠，噻氯匹定仅对猴和犬的KM代谢为弱抑制(抑制率20.43%～44.31%)，说明在体情况下，CYP2B、CYP2D和CYP2C与KM的代谢可能无关。 结论 KM在人与猪、大鼠、犬、猴肝微粒体中的主要代谢途径相同，均由CYP3A酶催化，但酶活性和代谢动力学特征有一定差异。

钩吻； 钩吻碱； 微粒体，肝； 色谱法，高压液相； 催化作用； 酶抑制剂

钩吻素子(koumine，KM)为钩吻中含量最高的一种假吲哚型生物碱。据报道,KM具有高效低毒的镇痛、抗焦虑、抗肿瘤、抗应激等药理作用[1-2]。近年来本课题组对KM进行了深入的研究，发现其还具有较强的治疗慢性神经疼痛、类风湿性关节炎等作用，具有创制新药的潜能[3-6]。前期研究显示，KM可在肝微粒体代谢，其在不同实验动物种属肝微粒体的主要代谢产物相同，但代谢特征及次要代谢产物构成具有一定的差异[6]。为探讨和比较KM在人与各种动物代谢的差异情况，本研究采用KM的盐酸盐(分子式为C20H22N2O·HCl，图1)，应用UPLC法测定其在肝微粒体孵育系统的代谢变化，并研究CYP酶特异性抑制剂对代谢的影响，判断和比较KM在人与4种实验动物肝微粒体的酶动力学特征和代谢酶亚型，为该药的进一步研发提供参考。……