张 洁， 郑碧云， 陈治新， 李 丹， 王小众

IL-10对稳定转染HBx基因的HL-7702细胞增殖的影响

张 洁， 郑碧云， 陈治新， 李 丹， 王小众

目的 探讨白细胞介素-10(IL-10)在稳定转染乙型肝炎病毒X(HBx)基因的HL-7702肝细胞增殖的作用及机制。 方法 CCK-8法测定HBx基因对HL-7702细胞增殖的作用及IL-10对HL-7702/HBx细胞增殖的作用；流式细胞术测定IL-10对HL-7702/HBx细胞凋亡的影响；RT-PCR法测定HBx基因对HL-7702细胞表达CDKN1B蛋白质mRNA的作用及IL-10对HL-7702/HBx表达CDKN1B mRNA的作用。 结果 CCK-8法显示，HL-7702/HBx细胞比HL-7702细胞和HL-7702/MOCK细胞增殖速度明显加快(P<0.05)；80 ng/mL的IL-10作用24 h可抑制HL-7702/HBx细胞增殖(P<0.05)；流式细胞术显示，80 ng/mL的IL-10作用24 h对HL-7702细胞、HL-7702/HBx细胞及HL7702/MOCK细胞凋亡均无影响；RT-PCR法显示，HL-7702/HBx细胞CDKN1B mRNA表达量较HL-7702细胞和HL-7702/MOCK细胞降低(P<0.05)，80 ng/mL的IL-10作用24 h后，HL-7702/HBx细胞较HL-7702/HBx空白组CDKN1B mRNA表达量上调(P<0.05)。 结论 HBx基因可促进HL-7702细胞增殖，IL-10可抑制HL-7702/HBx细胞增殖而对其凋亡无影响。HBx基因可能通过下调HL-7702/HBx细胞CDKN1B mRNA的表达量而促进细胞增殖，IL-10可能通过上调HL-7702/HBx细胞CDKN1B mRNA的表达量而抑制细胞增殖。

病毒蛋白质类； 肝细胞； 肝炎病毒，乙型； 白细胞介素10； *细胞转化，肿瘤； 细胞增殖

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)基因X区负责编码乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)。HBx发挥生物学功能并不通过与HBV DNA的直接作用，而是通过和肝细胞内多种蛋白质相互作用而调节肝细胞的生物学性质[1]。HBx在调节肝细胞增殖和凋亡、细胞周期、基因转录和信号转导等方面均可发挥作用[2]，在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的发生及发展中起重要作用。白细胞介素-10(interleukin-10, IL-10)在多种肝病的预防和治疗中具有一定的应用前景，如IL-10水平的改变与肝脏损伤相关，水平降低时肝脏受损加重[3]；动物模型实验也已证实，IL-10具有抑制肝纤维化的作用[4-5]。因此，本研究拟探讨HBx基因在肝细胞增殖、恶性转变中的作用，以及IL-10对HL-7702/HBx细胞增殖的作用及其可能的分子机制，为临床预防和治疗HBV相关性HCC提供一定的实验基础。

1 材料与方法

1.1 材料 HL-7702/HBx细胞(转染重组HBx慢病毒载体的HL-7702肝细胞)、HL-7702/MOCK细胞(转染慢病毒空载体的HL-7702肝细胞)、HL-7702细胞均为本实验室冻存。人IL-10(美国PeproTech公司)；Cell Counting Kit-8(CCK-8, 日本Dojindo公司)；Taq DNA聚合酶和MMLV逆转录试剂(美国Thermo公司);100 bp DNA Ladder(加拿大Fermentas公司);Annexin V-PE凋亡检测试剂盒(美国BD公司)。……