王正想 张国强 高顺强 刘思源



·论著·

转染c-kit基因对A375细胞增殖和凋亡的影响

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目的： 明确转染c-kit基因对A375细胞增殖、凋亡的影响。方法： 体外培养人恶性黑素瘤A375细胞，分为A组(实验组)、B组(转染空病毒载体的阴性对照组)、C组(空白对照组)。转染后采用RT-PCR检测c-kit mRNA表达情况，在倒置相差显微镜观察A375细胞分化及形态，MTT比色分析法检测对A375细胞增殖抑制的影响，流式细胞分析术，Anexin-v-PI双染色检测细胞早期凋亡的变化。结果： 转染后A组细胞出现不同程度的皱缩、破裂，漂浮细胞增多。RT-PCR半定量分析结果显示，A组扩增出c-kit cDNA 230 bp大小片段，而B、C组则没有扩增出相应大小的片段。转染后A组OD值低于B、C组(P<0.05)，A组早期凋亡率高于B、C组有显著性差异(P<0.05)。结论： 转染c-kit后A375细胞增殖被抑制，早期凋亡增加。

黑素瘤； 转移性； A375细胞； 早期凋亡

近年来恶性黑素瘤(malignant melanoma, MM)发病率有明显上升趋势，其发病率正以每年4.1%的速度显著上升，快于任何其他恶性肿瘤[1]。早期黑素瘤患者预后较好，治疗以手术为主；晚期黑素瘤的治疗一直没有突破，转移性恶性黑素瘤患者中位生存期仅为6～9个月，5年生存率不足5%。恶性黑素瘤的免疫及基因治疗方法，受到广泛关注。促分裂原活化蛋白激酶通路(MAPK通路)是与黑素瘤发病密切相关的分子相关通路之一，c-kit可以激活MAPK通路,P13K-AKT通路和Janus激酶传感信号以及STAT转录，维持正常黑素细胞的稳定。c-kit与NRAS突变主要与躯干型黑素瘤和黏膜型黑素瘤相关[2]。c-kit过表达与肿瘤增殖、侵袭及转移的机制仍有待进一步研究。本研究利用腺病毒相关载体建立稳定表达c-kit的恶性黑素瘤细胞A375细胞株，观察其对肿瘤细胞生物活性的影响，探索有效针对侵袭性、恶性黑素瘤的靶向治疗提供方向，为恶性黑素瘤的临床治疗提供一个新的思路。……