朱 敏， 徐 运， 张 跃， 汤 健， 华 裕， 赵晓科， 杜森杰

慢病毒介导的EphrinB2基因转染大鼠骨髓间充质干细胞表达的实验研究

朱 敏1， 徐 运2， 张 跃1， 汤 健1， 华 裕1， 赵晓科1， 杜森杰1

目的 将携带EphrinB2基因慢病毒转染至骨髓间充质干细胞(BMSCs)，检测其过表达水平及细胞形态学变化，并探讨EphB4/EphrinB2是否具有促进大鼠BMSCs体外迁移活性的作用。方法 单纯贴壁法分离大鼠BMSCs，倒置显微镜观察细胞生长形态。携带EphrinB2慢病毒以感染复数3和10感染BMSCs分为低浓度转染组(MOI=3)和高浓度转染组(MOI=10)，对照组采用未转染组、阴性转染组，利用qPCR检测EphrinB2基因表达及Western blot检测EphrinB2蛋白水平。观察EphrinB2基因转染后BMSCs形态学变化。15 d后通过免疫荧光检测MAP2表达了解细胞分化。进一步Transwell实验检测细胞迁移能力来了解EphB4/EphrinB2在调节干细胞迁移的作用。结果 培养BMSCs为多角形或棱形呈漩涡状排列生长。EphrinB2-BMSCs经qPCR和Western blot检测证实有外源性EphrinB2表达。EphrinB2基因转染后BMSCs 24 h，BMSCs胞体开始收缩细胞有突起伸出,72 h后可见典型的神经样细胞形态改变。15 d后，BMSCs分化成为MAP2神经元，与阴性转染组相比，低浓度转染组和高浓度转染组MAP2表达率上升(P< 0.05)。Transwell实验结果显示：低浓度转染组与高浓度转染组较未转染组及阴性转染组穿膜细胞数量明显增加(P<0.05)。结论 慢病毒介导EphrinB2能高效感染BMSCs,并随着时间延长分化成神经样细胞，同时EphB4/EphrinB2在调节BMSCs迁移具有重要作用。

EphrinB2; EphB4； 骨髓间充质干细胞； 神经干细胞； 迁移

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell，BMSCs)是存在于骨髓中明显有别于造血干细胞的一类前体细胞。体内外研究发现，在特定环境下BMSCs在适宜诱导剂、细胞因子等作用下可被诱导分化为神经元样细胞等；而且与胚胎神经发生、神经干细胞成熟、迁移方式一致，趋向游走定位性准确[1,2]。最新研究发现红细胞生成素肝细胞受体(erythropoietin-producing hepatocelluar receptor,Eph受体)是最大酪氨酸激酶受体家族，其配体主要表达于细胞表面，被命名为ephrin(eph family receptor interacting protein)。……