洪 翔，朱新雅，贾子樊，黄 晗，谭 旭，范晓光

(1.天津科技大学 工业发酵微生物教育部重点实验室，天津 300457；2.天津科技大学 生物工程学院，天津 300457；3.天士力控股集团有限公司 健保食品开发中心，天津 300040)

利用重组枯草芽孢杆菌L-氨基酸连接酶合成丙谷二肽

洪 翔1,2，朱新雅1,2，贾子樊1,2，黄 晗2，谭 旭3，范晓光1,2

(1.天津科技大学 工业发酵微生物教育部重点实验室，天津 300457；2.天津科技大学 生物工程学院，天津 300457；3.天士力控股集团有限公司 健保食品开发中心，天津 300040)

利用大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE 3)克隆并表达来源于枯草芽孢杆菌BacillussubtilisATCC 15245的L-氨基酸连接酶(L-amino acid ligase，Lal)基因，采用Ni-NAT亲和层析法分离纯化得到重组的Lal，并以L-丙氨酸和L-谷氨酰胺为底物制备L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(丙谷二肽).Lal属于ATP依赖酶，研究结果表明其最适反应温度和pH值分别为37 ℃和9.0，连续催化反应14 h可催化等摩尔的底物氨基酸(30 mmol/L)生成22.4 mmol/L的丙谷二肽，最高摩尔转化率可达74.7%.成功克隆表达了枯草芽孢杆菌的L-氨基酸连接酶，并将其应用于丙谷二肽的酶法合成，研究结果可为丙谷二肽的生物制造奠定理论基础.

丙谷二肽；L-氨基酸连接酶；枯草芽孢杆菌；大肠杆菌；酶法合成

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(丙谷二肽)是由L-丙氨酸和L-谷氨酰胺缩合形成的二肽，属于氨基酸类的化学药剂，也是国际公认的L-谷氨酰胺的最适载体.丙谷二肽的水溶性可以达到586 g/L，在体内能够迅速地分解为L-谷氨酰胺和L-丙氨酸，并能够被有效地吸收和利用，因此常作为术后病人的必须营养注射液使用[1-2].目前，工业生产……