樊红军，谷杰，周丽丽

长春市食品药品检验中心，吉林长春130021

HPLC法测定三七伤药片、胶囊和颗粒中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量

樊红军，谷杰，周丽丽

长春市食品药品检验中心，吉林长春130021

目的建立HPLC法测定三七伤药片、三七伤药胶囊、三七伤药颗粒中三七的含量测定方法。方法色谱柱：Agilent HC C18(250×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈：水，采用梯度洗脱程序；检测波长：203 nm。结果人参皂苷Rg1在0.276～2.346 μg范围内，线性关系良好，r=0.999 9；平均回收率为99.01%（n=6）,RSD=2.5%；人参皂苷Rb1在0.243 2～2.067 2 μg范围内，线性关系良好，r=0.999 9；平均回收率为98.38%（n=6）,RSD=1.5%。结论该法简便，准确，重现性好，可作为评价三七伤药片、三七伤药胶囊、三七伤药颗粒的质控方法。

三七；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；含量测定；高效液相色谱

三七伤药片、三七伤药胶囊、三七伤药颗粒为骨科用药，只要功效为舒筋活血，散瘀止痛，用于跌打损伤，风湿瘀阻；急慢性扭挫伤，神经痛[1-2]。该系列品种均由三七、制草乌、雪上一枝蒿、冰片、骨碎补、红花、接骨木和赤芍八味药材组成的复方制剂，三七为君药，具有散瘀止血，消肿止痛之功效[3]。控制其质量十分必要，参照中国药典三七项下分析方法进行了含量测定研究[4]。实验结果表明由于制剂中干扰因素较多，三七皂苷R1无法检测，因此对人参皂苷Rg1、Rb1的含量进行了测定，具有合理性，且方法易于操作，阴性无干扰，结果准确，重现性良好，可作为评价三七伤药系列品种的质控标准。

1 仪器与试药

Agilent1100 series高效液相色谱仪；试剂均为色谱纯或分析纯；对照品人参皂苷Rg1（110754-200421）、Rb1（110734-200726）,均购自中国药品生物制品检定所。三七伤药片为上海上联药业提供，批号：100301。

2 色谱条件

Agilent HC C18分析柱(250×4.6mm,5 μm)，柱温40℃，流速0.8 mL/min，检测波长203 nm，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表1进行梯度洗脱。

表1 不同时间梯度洗脱的比较（%）

3 试验方法

3.1 对照品溶液的制备

精密称取在105℃干燥12 h的人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合溶液，摇匀，即得。

图1 三七阴性对照溶液色谱图

图2 人参皂苷Rg1人参皂苷Rb1对照品溶液色谱图

图3 三七供试品溶液色谱图

3.2 供试品溶液的制备

取该品2 g，研细，精密称定，精密加入甲醇50 mL，称定重量，放置过夜，超声处理(功率350 W，频率50 kHz) 40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，水浴蒸干，残渣加水15 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，20 mL/次，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得，见图1、图2、图3。

3.3 标准曲线制备

精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg1对照品0.138 mg、人参皂苷Rb1对照品0.1212 mg的混合溶液，分别精密吸取2、5、8、11、14、17 μL注入液相色谱仪，依法测定，以对照品溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。见表2、表3。

表2 人参皂苷Rg1标准曲线数据

表3 人参皂苷Rb1标准曲线数据

结果表明，人参皂苷Rg1在0.276～2.346 μg、人参皂苷Re在0.243 2～2.067 2 μg范围内，呈良好线性关系，符合外标法定量测定的要求。

3.4 精密度试验

精密吸取供试品溶液5 μL，注入液相色谱仪，重复进样6次，测定其色谱峰面积值。见表4、表5。

表4 人参皂苷Rg1精密度试验结果

表5 人参皂苷Rb1精密度试验结果

结果表明，所用仪器具良好的精密性。

3.5 稳定性试验

取供试品溶液5 μL，按正文色谱条件，于不同的时间进行测定，结果见表6、表7。

表6 人参皂苷Rg1稳定性试验结果

表7 人参皂苷Rb1稳定性试验结果

结果表明6 h内供试品溶液中人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量基本稳定。

3.6 重复性试验

取同一批号样品（广西玉林制药有限公司310052），依正文方法独立操作，测定6次，结果见表8、表9。

结果表明本法具有良好的重复性。

表8 人参皂苷Rg1重复性试验结果

表9 人参皂苷Rb1重复性试验结果

3.7 回收率试验

取已知含量的供试品：人参皂苷Rg13.789 4 mg/g、人参皂苷Rb12.857 8 mg/g各6份，每份约1.0 g，精密称定，分别精密加入配成含对照品溶液人参皂苷Rg1（0.044 62 mg/mL）、人参皂苷Rb1（0.0350 64 mg/mL）的对照品溶液50 mL，依含量测定项下方法测定。计算回收率，结果见表10、表11。

如上表所示，人参皂苷Rg1的平均回收率为99.01%, RSD=2.52%；人参皂苷Rb1的平均回收率为98.38%, RSD=1.51%；证明方法具有一定的准确性，方法可行。

3.8 检出限与定量限。

检出限为信噪比的3倍高，精密量取人参皂苷Rg1（138.0 μg/mL）和人参皂苷Rb1（121.6 μg/mL）对照品溶液,照正文方法检测，进样量为0.5μL。检出限分别为0.069 μg和0.061 μg。

定量限为信噪比的10倍高，精密量取人参皂苷Rg1（138.0 μg/mL）和人参皂苷Rb1（121.6 μg/mL）对照品溶液依照正文方法检测，进样量为1.5 μL，定量限分别为0.207 μg和0.183 μg。连续测定6次，平均值分别为84.71（RSD=1.27%）和52.67（RSD=2.32%）。符合定量分析的要求。

表10 人参皂苷Rg1回收率试验结果

表11 人参皂苷Rb1回收率试验结果

表12 三七伤药片11批样品人参皂苷Rg1人参皂苷Rb1总量测定结果

表13 三七伤药胶囊10批样品人参皂苷Rg1人参皂苷Rb1总量测定结果

表14 三七伤药颗粒样品人参皂苷Rg1人参皂苷Rb1总量测定结果

3.9 样品测定

依法测定三七伤药片、胶囊和颗粒样品。见表12、表13、表14。

4 讨论

不同厂家色谱柱耐用性考察：取同一供试品溶液分别采用Agilent HC C18（4.6×250 mm,5 μm）的色谱柱、Diamonsil C18（250×4.6mm,5 μm）的色谱柱、Agilent Extent C18（4.6×250 mm,5 μm）的色谱柱按正文拟订的方法测定。

实验结果显示，所选用的三种色谱柱均达到方法系统适用性的要求。但是Agilent HC C18(250×4.6 mm,5 μ)柱和Agilent Extent C18(250×4.6 mm,5 μ)柱可在60 min内将人参皂苷Rg1、Rb1混合对照品溶液完全分离，Diamansil C18(4.6×250 mm，5 μm)柱超过100 min，说明其对色谱柱有一定的选择性。故本法采用Agilent HC C18(250×4.6 mm,5 μ)柱。

[1]魏莉本.三七伤药片的质量分析与质量标准探讨[J].中国药师,2011,14(7):1060-1061.

[2]贾春芝,高波.玉林三七伤药胶囊活血止痛作用的临床观察[J].山西中医学院学报,2003,4(4):27.

[3]李家实.中药鉴定学[M].上海:上海科学技术出版社,1998: 1321.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:11.

Analysis of HPLC Method in Measuring the Ginsenoside Rg1 and Rb1 in the Sanqishangyao Tablets and Capsules and Granules

FAN Hong-jun,GU jie,ZHOU Li-li
Changchun Food and Drug Test Center,Changchun,Jilin Province,130021 China

ObjectiveTo establish the method of HPLC method in measuring the ginsenoside Rg1 and Rb1 in the sanqishangyao tablets and capsules and granules.MethodsChromatographic column Agilent HC C18(250×4.6 mm,5 μ),mobile phase:acetonitrile,water,gradient elution program,determine wavelength:203 mm.ResultsGinsenoside Rg1 was between 0.276 and 2.346 μg,and the liner correlation was good,r=0.999 9,The average recovery was 99.01%(n=6),RSD=2.5%. Ginseng saponin Rb1 in 0.243 2～2.067 2 μg,and the liner correlation was good,r=0.999 9,the average recycle rate 98.38%(n=6),RSD=1.5%.ConclusionThe method is simple and accurate,and the reproducibility is good,which can be used as the quality control method of evaluating the Sanqishangyao tablets and capsules and granules.

Sanqi;Ginsenoside Rg1;Ginsenoside Rb1;Measurement of constant;High-pressure liquid chromatography

R286.0

A

1672-5654（2017）05（a）-0077-05

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.13.077

2017-02-11）

樊红军（1966-），男，吉林长春人，本科，主任药师，研究方向：检验机构管理。