高丽丽，朱长乐

不同免疫组化法检测PHH3蛋白染色的比较

高丽丽，朱长乐

PHH3；免疫组织化学；抗原修复

组蛋白H3是细胞核染色质的重要组成成分，也是核心组蛋白之一[1-2]。PHH3是磷酸化的组蛋白H3，其只存在细胞有丝分裂期而不出现于分裂间期和凋亡细胞中，从而有利于有丝分裂细胞的计数[1-4]。Ribalta等[4]报道PHH3蛋白可以帮助脑膜瘤的肿瘤分级以及区分凋亡细胞；在皮肤的平滑肌肿瘤中简单计数核分裂细胞[5]；Tsuta等[6]认为，PHH3同样可以在肺神经内分泌癌中计数核分裂细胞；除此之外，PHH3还可以预测星形细胞瘤患者的生存期[7]，协助子宫内膜癌的病理分级等[8]。因此采用免疫组化(immunohistochemistry, IHC)检测PHH3蛋白表达具有重要意义，本文现采用不同IHC法检测PHH3，探讨最佳染色方案。

1 材料与方法

1.1 材料 收集江苏省中医院病理科不同肿瘤组织石蜡标本50例(胃肠道间质瘤19例、乳腺浸润性导管癌2例、节细胞神经瘤1例、子宫平滑肌瘤11例、神经鞘瘤3例、肾上腺皮质腺瘤6例、脂肪肉瘤3例、胶质母细胞瘤4例、脑膜瘤1例)，其中19例有核分裂象的肿瘤组织采用IHC法检测PHH3蛋白表达。一抗PHH3分别为RAB-0693(福州迈新公司)、ZA-0477(北京中杉金桥公司)产品，二抗EliVision购自福州迈新公司，修复液分别购自福州迈新、DAKO、罗氏公司，其余试剂均购自福州迈新公司。

1.2 方法 (1)石蜡切片(3 μm)，烤片(65 ℃ 1 h)，二甲苯脱蜡，梯度乙醇至水化，自来水冲洗；(2)3种抗原修复方法分别为：柠檬酸盐(pH 6.0)高压100 ℃修复2 min；DAKO公司的EnVision FLEX修复液(pH 9.0)96 ℃，20 min；Ventana的CC1修复液(pH 8.0)，95～100 ℃ 30 min；(3)PBS(pH 7.2～7.4)洗涤，每次3 min；(4)非免疫羊血清孵育，RT，10 min；(5)一抗孵育，4 ℃过夜；(6)室温放置30 min使切片恢复至常温，PBS洗涤，每次3 min；……