李 娟,李国丽,翟立翔,李师翁,*,陈熙明

(1.兰州交通大学化学与生物工程学院,甘肃省极端环境微生物资源与工程重点实验室,甘肃兰州 730070;.中国科学院西北生态环境研究院沙漠与沙漠化重点实验室,甘肃兰州 730000)

乳酸克鲁维酵母超量表达葡萄糖氧化酶的研究

李 娟1,李国丽1,翟立翔1,李师翁1,*,陈熙明2

(1.兰州交通大学化学与生物工程学院,甘肃省极端环境微生物资源与工程重点实验室,甘肃兰州 730070;.中国科学院西北生态环境研究院沙漠与沙漠化重点实验室,甘肃兰州 730000)

本研究应用具有超量分泌表达能力的乳酸克鲁维酵母(KlSEL1基因突变型)、游离型载体pKDU7以及整合型表达载体pKLAC1,对具有5个氨基酸点突变的葡萄糖氧化酶(该突变酶的比活是野生型葡萄糖氧化酶的3.24倍)进行分泌表达。最终获得了一株可以超量分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株,其最大产量为70±7 kU/L。这是现今已报道的分泌表达葡萄糖氧化酶能力最高的乳酸克鲁维重组菌株,为食品安全级的葡萄糖氧化酶的生产和应用提供了新途径。

葡萄糖氧化酶,乳酸克鲁维酵母,表达

葡萄糖氧化酶能够在有氧气的条件下专一性地催化D-葡萄糖生成过氧化氢和葡萄糖酸。这类酶最早在黑曲霉中被发现并广泛应用。例如被用作面粉添加剂和食品保鲜剂[1],用来生产葡萄糖酸[2]以及作为肠道微生物菌群调节剂[3]。工业化生产中常用黑曲霉和青霉发酵来生产葡萄糖氧化酶,然而在发酵过程中常会伴随产生过氧化氢酶、淀粉酶等其他杂蛋白[4-5],给后期的纯化工作带来很大的困难,利用基因工程菌株重组表达有利于解决这一难题。……