王蕾，张庆玲

(1南方医科大学南方医院，广州510515;2南方医科大学基础医学院·广东省分子肿瘤病理学重点实验室)

小鼠结直肠癌CT26细胞WTX基因稳定干扰系的建立

王蕾1,2，张庆玲1,2

(1南方医科大学南方医院，广州510515;2南方医科大学基础医学院·广东省分子肿瘤病理学重点实验室)

目的 应用WTX基因重组慢病毒干扰载体，感染小鼠结直肠癌CT26细胞，建立WTX稳定干扰小鼠结直肠癌CT26细胞系。方法 慢病毒感染小鼠结直肠癌CT26细胞，荧光显微镜初步观察感染效率，G418进一步筛选得到稳定感染细胞系。qPCR及Western blotting、免疫组织化学检测WTX mRNA及蛋白干扰效率。结果 慢病毒感染小鼠结直肠癌CT26细胞后，WTX基因mRNA及蛋白表达水平明显下调，差异有统计学意义，CT26结直肠癌细胞WTX干扰稳定细胞系构建成功。结论 用慢病毒感染方法成功建立了小鼠结直肠癌CT26细胞WTX稳定干扰细胞系。

结直肠癌；WTX基因；慢病毒载体； 稳定转染

WTX基因(又称作FAM123B、AMER1、OSCS)，是Rivera等在肾母细胞瘤(Wilms瘤)的研究中发现的首个位于X染色体上的抑癌基因WTX基因[1]。不同于常染色体显性遗传的肿瘤抑制基因，WTX经由单次打击目标男性X染色体或活跃的女性X染色体而发生突变或失活[2]。WTX基因最初从肾Wilms瘤患者中发现，目前对WTX的研究主要集中于Wilms瘤方面[3]。研究发现Wilms瘤中WTX的突变是其主要失活机制，Wilms瘤中WTX基因以Wnt/β-catenin信号通路为作用靶点。WTX通过与APC结合，诱导β-catenin蛋白的降解而抑制Wnt信号通路的传导[4]。已知Wnt/β-catenin信号通路是一个由多种分子参与、相互影响、相互制约和协同作用的复杂体系，对细胞增殖和分化及肿瘤发生发展等多种生理病理有重要调节作用[5]。……