相茂花，相茂功

（1.日照市食品药品检验检测中心，山东 日照 276826；2.山东众山生物科技有限公司，山东 日照 276808）

运用近红外光谱法对青霉素V钾片一致性检验的研究

相茂花1，相茂功2

（1.日照市食品药品检验检测中心，山东 日照 276826；2.山东众山生物科技有限公司，山东 日照 276808）

目的 运用近红外光谱法分析不同厂商不同批次的青霉素V钾，进行一致性检验，评价红外光谱分析价值。方法 分配采购5个厂家50个批次的青霉素V钾片，每批次样品随机抽取3片，进行红外光谱检测计算平均光谱，建立近红外定性模型并进行验证，从每批次测定10张光谱，两台仪器共检测10×50×2个光谱，每个厂家100个光谱，其中每个厂家30张作为建模参考光谱，不同人员进行验证。结果 高效液相色谱法与近红外光谱法对50个批次的样品来源厂商聚类鉴定结果均达到100.0%，高效液相色谱法鉴定不合格产品1批次，近红外光谱也检出该批次不合格样品。加速后，样品的近红外光谱较同批次产品发生显著变化，采用高效液相色谱法彻底加速后样本青霉素V浓度为（98.5±0.4）%，加速后为（95.3±0.7）%，差异有统计学意义（P＞0.05）。结论 近红外光谱法对青霉素V钾片一致性检验效果较好，对青霉素V钾含量变化非常敏感，同时还可进行聚类分析，判断产品的来源。

青霉素V钾片；近红外光谱；药物质量

药物的无损检测一直是药品质量管理中常用的技术以及研究热点，近红外光谱法是药物生产过程中在线分析、药物质量鉴定、过程控制的常用技术。青霉素V钾片是一种抗生素，属于β内酰胺类抗生素，相较于青霉素G，其对酸稳定，口服吸收好，对耐药性金葡菌引起的感染疗效较好，目前全世界青霉素V的产量约为1万吨，且这一数字仍在不断上升，在美国有报道显示青霉素V钾片属四大常用抗生素[1]。在我国青霉素V钾片的生产时间较晚，直至上世纪末才开始批量生产，青霉素V钾片因口服方便，价格适中，越来越受到欢迎，加强青霉素V钾片质控非常必要。本次研究运用近红外光谱法分析不同厂商不同批次的青霉素V钾，进行一致性检验，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与药物

Bruker VECTOR22/N傅立叶变换近红外光谱仪，附有OPUS5.0软件，U-4100紫外/可见/近红外分光光度计。分配采购5个厂家50个批次的青霉素V钾片，每个厂家10个批次。分别为华北、山西大同、吉林、杭州、江西五个地区生产。对照品：中国药品生物制品检定院，苯氧乙酸对照片、苯氧甲基青霉噻唑酸A型与B型对照品、苯氧基氨酸脱羧青霉噻唑酸A型与B型对照品。

1.2 方法

每批次样品随机抽取3片，采用漫反射光线探头压住药物，每片正面反面都检测1次，取平均光谱作为样品光谱。采集条件：内置背景为参比，扫描范围120000～4000/cm，扫描次数32次，分辨率为8/cm，计算平均光谱。建立近红外定性模型并进行验证，从每批次测定10张光谱，两台仪器共检测10×50×2个光谱，每个厂家100个光谱，其中每个厂家30张作为建模参考光谱，不同人员进行验证。一致性建模参数：二阶导数加矢量归一化，平滑点13个，谱段9000～5000/cm、4500～3200/cm、3000～3250/cm，CI限度为7。结果显示，不同厂家的图谱均未通过验证，提示此光谱一致性模型能够有效的区分不同厂家青霉素V钾片光谱，模型有较好的专属性，模型识别率为100%，对10个验证的样品进行模型预测，结果显示预测率为100%。另取3批检验合格，青霉素V含量在99%以上的样品，市售包装，在（40±2）℃条件下放置1周，而后扫描近红外光谱。最后，采用高效液相色谱法检测不同厂商生产产品中的5个厂商杂质以及青霉素V含量水平，对比高效液相色谱法进行样本鉴定与近红外光谱样品鉴定结果。

1.3 观察指标

高效液相色谱法、近红外光谱对50个批次的样品来源厂商聚类鉴定结果。对比高效液相色谱法样本鉴定成分分析结果，近红外光谱对样品青霉素V纯度的鉴定结果。近红外光谱对加速试验后样品、加速前同批次样品的鉴定结果，加速前后青霉素V含量水平变化。

1.4 统计学处理

采用SPSS 20.0软件进行统计学计算，青霉素V含量服从正太分布采用（Mena±SD）符号（±s）表示，组间比较采用t检验，鉴定结果采用x2检验组间比较，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结 果

高效液相色谱法与近红外光谱法对50个批次的样品来源厂商聚类鉴定结果均达到100.0%。高效液相色谱法鉴定不合格产品1批次，近红外光谱也检出该批次不合格样品。高效液相色谱法对同批次青霉素V含量分析与近红外光谱分析结果相近。加速后，样品的近红外光谱较同批次产品发生显著变化，采用高效液相色谱法彻底加速后样本青霉素V浓度为（98.5±0.4）%，加速后为（95.3±0.7）%，差异有统计学意义（P＞0.05）。

3 讨 论

本次研究通过建模，采用矢量归一化对原光谱进行预处理后，并采用标准算法计算光谱距离，在9000-5000/cm、4500-3200/cm、3000-3250/cm光谱范围内建立了青霉素V钾片一致性检验以及聚类分析模式。结果显示，模型对50个批次的样品来源厂商聚类鉴定结果达到100.0%，对不合格批次样品的敏感性较高，对青霉素V含量的估算与高效液相色谱法相近，可作为代表性样品的频率与范围和定性分析方法[2]。需注意的是，在我国不同生产商的青霉素V制备工艺、质控能力存在一定的差异，种子制备、发酵工艺存在偏差，这影响模型的构建，应选择具有代表性的样品构建模型，重视数据分析，选择合适的验证集合。同时结合液相色谱-质谱联用等灵敏性较高的技术验证模型的分析效用。近红外光谱法对于杂质的性质分析比较困难，其无法进行直接分析，需要借助标准以及化学计量学方法进行二次分析，有必要结合前文提到的定性分析技术，提高近红外光谱法对杂质的识别能力。同时重视标准数据库的建立与完善，开发研制辅助设备，进一步发挥近红外光谱法在药品快速检测领域的价值[3]。

小结：近红外光谱法对青霉素V钾片一致性检验效果较好，对青霉素V钾含量变化非常敏感，同时还可进行聚类分析，判断产品的来源，今后需结合定量分析技术，提高近红外光谱法对杂质的识别能力。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部).化学工业出版社,2000:1287-1288.

[2] 褚小立.化学计量学方法与分子光谱分析技术[M].北京:化学工业出版社,201l:7.

[3] 陈 希,吴 鑫,鄢雷娜,等.国产青霉素 V钾片质量评价[J].今日药学,2016,26(10):707-709.

本文编辑：吴玲丽

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ISSN.2095-8242.2017.32.6155.02