饶国洲,娄 鸣,景 娟,牛 洁

1.西安交通大学口腔医院医学研究中心(西安710004),2.西安医学院口腔系(西安710021)

survivin和bcl-2双基因敲减对人舌癌裸鼠移植瘤的抑制作用*

饶国洲1,娄 鸣2,景 娟1,牛 洁1

1.西安交通大学口腔医院医学研究中心(西安710004),2.西安医学院口腔系(西安710021)

目的：探讨survivin和bcl-2单基因与双基因敲减后对舌癌裸鼠移植瘤成瘤性的影响。方法：将筛选含有转染survivin siRNA-Tca8113；bcl-2 siRNA-Tca8113；survivin/bcl-2 siRNA-Tca8113；Negative-siRNA-Tca8113细胞及未转染的Tca8113细胞分组进行培养，细胞数调成1×107细胞/ml接种于裸鼠左后肢股部,以无菌生理盐水做阴性对照,隔日观察裸鼠肿瘤发生情况,并测量肿瘤大小、体积。接种5周后处死并测量肿瘤体积大小、比较抑制结果及肿瘤组织切片HE染色病理分析。结果：肿瘤形成率显示空白对照、Lipofectamine和Negative-siRNA三组的裸鼠成瘤率100%，生长速度快、瘤体大；单基因敲减组(bcl-2 siRNA、survivin siRNA)和双基因敲减组(survivin/bcl-2siRNA)瘤体较空白对照组小,生长速度慢；双基因敲减组成瘤率低(66.6%),注射生理盐水的阴性对照组接种后未出现肿瘤。肿瘤生长曲线显示空白对照、Lipofectamine、Negative-siRNA 三组肿瘤生长速度明显快于单基因敲减和双基因敲减组,而双基因敲减组不仅成瘤延长，而且生长速度明显慢于单基因敲减组。肿瘤抑制率显示双基因敲减(84.5%)明显高于单基因敲减(67.6%和69.8%,P<0.05)；肿瘤组织HE染色镜下可见：空白对照、Lipofectamine、Negative-siRNA组肿瘤呈浸润性生长,有大片坏死区,survivin和bcl-2基因敲减后的肿瘤组织与周围组织分界较清,未见明显浸润现象,肿瘤组织坏死区较少。结论：survivin和bcl-2基因敲减能有效抑制裸鼠移植瘤成瘤性,双基因敲减对裸鼠移植瘤抑制作用强于单基因敲减。

在本项目前期的实验研究中[1-4],针对survivin和bcl-2基因各设计4对RNA干扰序列,经筛选得到2条有效干扰序列分别转染到高表达survivin和bcl-2蛋白的Tca8113细胞中,筛选到稳定表达的转化子细胞。实验中观察到干扰后的细胞生长受到抑制且细胞发生凋亡，这种作用表现于双基因干扰效果优于单基因干扰的效果。……