苏冬娜　吴诗品

(深圳市人民医院感染内科,深圳518020)



Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞在体外对肝星状细胞TGF-β1信号传导的影响①

苏冬娜吴诗品

(深圳市人民医院感染内科,深圳518020)

目的：探讨Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞(Smad7-EGFP-BMSCs)在体外抑制肝纤维化的机制。方法：分离、纯化大鼠BMSCs并经Smad7基因腺病毒质粒(Ad-Smad7-EGFP)转染建立Smad7-EGFP-BMSCs。实验将大鼠肝星状细胞HSC-T6分为A组、B组、C组和D组，分别与Smad7-EGFP-BMSCs、BMSCs、Smad7质粒及PBS进行共同培养72 h，采用ELISA测定培养液中Smad7和TGF-β1的表达，采用Western印迹法和RT-PCR法测定细胞Smad7、TGF-β1、Col Ⅰ、α-SMA蛋白和mRNA的表达，采用流式细胞术测定细胞凋亡情况。结果：(1)ELISA结果显示，B组、C组和D组培养液TGF-β1蛋白水平较A组显著降低(P<0.01)，而Smad7 蛋白水平较A组显著升高(P<0.01)；D组TGF-β1 蛋白水平较B组和C组显著降低(P<0.01)，而Smad7 蛋白水平较B组和C组显著升高(P<0.01)；(2)Western印迹法和PCR结果显示，B组、C组和D组TGF-β1、ColⅠ和α-SMA 蛋白和mRNA表达水平较A组显著降低(P<0.01)，而Smad7 蛋白和mRNA表达水平较A组显著升高(P<0.01)；D组TGF-β1、ColⅠ、α-SMA蛋白和mRNA表达水平较B组和C组显著降低(P<0.01)，而Smad7 蛋白和mRNA表达水平较B组和C组显著升高(P<0.01)；(3)流式细胞仪检测结果显示，B组、C组和D组HSC-T6细胞凋亡率较A组显著升高(P<0.01)，而D组细胞凋亡率较B组和C组显著升高(P<0.01)。结论：Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞可通过作用肝星状细胞TGF-β1信号转导通路以及促进星状细胞凋亡而具有抗肝纤维化的作用。

Smad7；骨髓间充质干细胞；肝星状细胞；TGF-β1信号通路；细胞凋亡

肝硬化是各种慢性肝病发展的晚期阶段，具有发病率高、治疗疗效差及死亡率高的特点，我国是肝硬化的高发国家，研究肝硬化治疗方法十分迫切。肝纤维化(Hepatic fibrosis，HF)是慢性肝病进展至肝硬化的重要阶段，以细胞外基质(Extra cellular matrix，ECM)过度沉积为主要病理特征[1,2]。肝星状细胞(Hepatic stellate cell，HSC)的激活是公认的肝纤维化形成中心环节[3]。肝星状细胞通过产生和分泌大量胶原蛋白破坏肝基质代谢的平衡，由胶原蛋白组成的胶原纤维积聚在肝基质中，导致慢性肝病和肝癌等肝脏疾病的纤维化病变[4]。而转化生长因子(Transforming growth factor-beta1，TGF-β1)通过其下游Smads等信号分子促进大鼠肝星状细胞活化、增殖，从而在肝纤维化发生发展的进程中发挥重要作用[5,6]。而Smad7是TGF-β1信号转导途径的主要抑制性蛋白，是抗纤维化作用的重要信号分子。……