虞　勇， 李明辉， 刘桂剑， 李冰玉， 邹云增， 陈瑞珍

复旦大学附属中山医院心内科，上海市心血管病研究所中心实验室，上海　200032



·技术与方法·

钙蛋白酶抑制蛋白基因过表达Balb/C小鼠的繁育及鉴定

虞勇， 李明辉， 刘桂剑， 李冰玉， 邹云增， 陈瑞珍*

复旦大学附属中山医院心内科，上海市心血管病研究所中心实验室，上海200032

目的： 建立钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin, CAST)基因过表达Balb/C小鼠的培育方法，并探讨碱性裂解液提取基因组DNA在子代鼠基因型鉴定中的价值。方法： 将雄性C57BL/6-CAST+/-转基因小鼠与雌性Balb/C野生型小鼠杂交，将雄性CAST+/-杂合子代小鼠与雌性Balb/C野生型子代小鼠杂交，连续杂交至消除C57BL/6小鼠遗传背景。取子代小鼠鼠尾组织，采用碱性裂解液提取基因组DNA，PCR法扩增CAST基因片段，琼脂糖凝胶电泳鉴定结果。采用柯萨奇B3病毒(CVB3)感染Balb/C-CAST-/-小鼠以建立急性病毒性心肌炎小鼠模型。结果： C57BL/6-CAST+/-转基因小鼠与雌性Balb/C野生型小鼠连续杂交10代可消除C57BL/6小鼠遗传背景。采用碱性裂解液提取的基因组DNA数量、纯度能够满足后续实验需要，且产物大小与目的片段一致。成功建立Balb/C-CAST-/-基因型小鼠急性病毒性心肌炎模型。结论： 成功建立Balb/C-CAST基因过表达小鼠，为后续研究奠定了基础；碱性裂解液提取基因组DNA简便、高效，值得推广。

钙蛋白酶；钙蛋白酶抑制蛋白；柯萨奇B3病毒；转基因；基因型鉴定

Calpain(钙蛋白酶)是主要存在于细胞质中的钙离子依赖性半胱氨酸蛋白酶，激活后能通过有限酶切割其底物，参与包括心血管疾病等的病理过程[1-2]。研究[3]发现，calpain在急性病毒性心肌炎(VMC)发病过程中被激活，介导柯萨奇B3病毒(CVB3)感染导致的心肌损伤。……