贾新平,孙晓波,梁丽建,邓衍明,苏家乐,周建涛

(江苏省农业科学院 园艺研究所,江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室,江苏 南京　210014)



绣球SSR-PCR反应体系的建立与优化

贾新平,孙晓波,梁丽建,邓衍明,苏家乐,周建涛

(江苏省农业科学院 园艺研究所,江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室,江苏 南京210014)

为了建立适合绣球的SSR-PCR反应体系,采用正交设计L25(56)对影响SSR-PCR反应体系的5个主要因素(Mg2+、dNTPs、引物、DNA模板和Taq聚合酶)在5个水平上进行优化,筛选出每个因素的最佳水平,建立适合绣球的SSR-PCR反应体系。结果表明,20 μL的SSR-PCR反应体系中,DNA模板用量为60 ng,Mg2+浓度为1.5 mmol/L,dNTPs浓度为0.3 mmol/L,引物浓度为0.4 μmol/L,Taq聚合酶用量为0.8 U。扩增程序为:94 ℃预变性5 min;94 ℃变性1 min,最佳温度退火40 s,72 ℃ 1 min,33个循环;72 ℃延伸10 min,4 ℃保存。选用10个绣球品种对建立的SSR-PCR反应体系进行验证,结果表明该体系具有较好的稳定性和通用性。建立和优化的绣球SSR-PCR反应体系,为应用SSR分子标记技术开展绣球属植物遗传育种研究提供了理论依据和技术参考。

绣球;SSR-PCR;正交设计;反应体系

绣球(Hydrangeamacrophylla)又称八仙花、紫阳花,是虎耳草科(Saxifragaceae)绣球属(Hydrangea)植物,主要分布于亚洲东南部和南北美洲[1]。全世界绣球属植物约有73种,而我国是绣球属植物的主要分布中心,现有47种和11个变种,约占世界资源的63%[2]。绣球的花序、花型、花色非常丰富,叶大而具有光泽,既可观花又可观叶,是世界园林中非常重要的观赏植物。绣球在不良环境中表现出较强的适应能力,具有耐荫、耐寒、抗病虫害等优良特性[3]。绣球不仅具有较高的观赏价值和经济价值,还具有一定的药用价值[4]。……