韩　潇，白　海，赵　强，杨　柯，欧剑锋

(1.兰州大学第二医院血液内科，兰州 730030；2.兰州军区兰州总医院血液科/全军血液病中心，兰州 730050)



论著·基础研究

人脐带间充质干细胞体外分离培养及其生物学特性的研究*

韩潇1,2，白海2△，赵强2，杨柯2，欧剑锋2

(1.兰州大学第二医院血液内科，兰州 730030；2.兰州军区兰州总医院血液科/全军血液病中心，兰州 730050)

目的研究人脐带间充质干细胞(MSCs)详细的生物学特性，包括其细胞形态、免疫表型、纯度及增殖能力，从而建立稳定的MSCs体外分离培养体系。方法将剔除动静脉及内膜的新鲜人脐带组织剪切成1 mm3小块，用含10% 胎牛血清的DMEM/F12培养，得到贴壁细胞。观察贴壁细胞形态，利用CCK-8试剂盒测定生长曲线，流式细胞术研究特殊细胞表面抗原CD29、CD73、CD90、CD105、CD31、CD14、CD34、CD45、CD11b、HLA-DR表达，并检测细胞周期。结果体外培养7～10 d后，可见细胞从组织块中游出；细胞主要呈纺锤体样、成纤维细胞样形态；生长曲线显示其增殖能力强；特殊表面抗原CD29、CD73、CD90、CD105表达强阳性，造血性抗原标志CD31、CD14、CD34、CD45、CD11b、HLA-DR表达均呈阴性，流式细胞仪周期检测结果显示G0/G1期细胞超过80%。结论利用组织块法可有效获得人脐带MSCs，具有高纯度、低成本优点，并在体外较易培养、扩增。

流式细胞术；人脐带间充质干细胞；培养；分离；组织工程

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是存在于多种组织中的一种非造血多能干祖细胞，可诱导分化成不同的细胞系。人体内包括骨髓、脂肪组织、皮肤、肝脏、胎盘及脐带在内的组织均可产生MSCs[1]。然而，来源不同的MSCs在分化成多种细胞系时具有不同的潜能。在活体条件下，MSCs最重要的特性是具有较强的自我更新能力和分化潜能，如成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞或骨骼肌细胞[2]。……