鲍昱辰 赵印敏 陈斌 罗洁 邓沁芳 孙辉 谢博雄 周崧雯

肺癌的发病率和死亡率很高，严重威胁人类健康[1,2]。在我国城市中肺癌死亡率已上升为第一位[3]。随着分子生物学的研究进展，靶向药已成为治疗非小细胞肺癌的重要手段[4]。然而，即使对于敏感人群，第一代表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors, EGFR-TKI）（包括易瑞沙、特罗凯、凯美纳）或早或晚仍会出现获得性耐药，导致疾病进展[5,6]，因此，如何克服耐药提高疗效已成为靶向药治疗的重要瓶颈[7,8]。分化抑制因子（differentiation inhibitory factor, ID）是一种负性调节因子[9,10]。近年的研究表明，ID蛋白在肿瘤发生及发展过程中发挥了重要作用[11]。ID1作为ID蛋白家族成员，在多种肿瘤中呈高表达，是一种潜在的癌基因[12,13]。有研究[14,15]认为ID1与肺癌靶向药耐药相关，但相关报道甚少，具体分子机制未明。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器 肺腺癌细胞株H522、H1975、A549、PC-9、PC-9R由上海市肺科医院中心试验室提供。其中PC-9为EGFR-TKI敏感株，PC-9R为EGFR-TKI获得性耐药株，H1975为T790M突变EGFR-TKI耐药株，A549、H522为EGFR-TKI原发耐药株，获取我院肺癌手术患者癌组织及癌旁组织。青霉素、链霉素购自上海先锋药业公司；Trizol试剂购自Invitrogen公司；SYBR Green PCR试剂盒购自TAKARA公司；RNaseI购自Fermentas公司；兔抗人单克隆抗体购自Abcam公司；BSA购自北京索莱宝生物科技有限公司；吉非替尼购自大连美仑；Realtime检测仪购自ABI公司；流式细胞仪购自Backman Coulter公司。

1.2 细胞培养 H522、H1975、A549、PC-9、PC-9R细胞用10%DMEM含双抗培养液在细胞恒温培养箱（温度为37 ℃且含5%CO2）中培养，次日换液。培养基为90%EMEM，10%胎牛血清。0.25%胰酶-EDTA消化传代，所有试验均采用对数生长期细胞。

1.3 ID1 siRNA慢病毒载体及ID1过表达慢病毒载体的构建ID1 siRNA慢病毒载体构建：shRNA序列：5’-CATGAACGGCTGTTACTCA-3’；……