马 超 冯文华 韩维田

辽宁省计划生育科学研究院分子遗传实验室(沈阳，110031)

·技术与方法·

HRM技术在掌跖角化病KRT9基因致病突变检测中的应用

马 超 冯文华 韩维田*

辽宁省计划生育科学研究院分子遗传实验室(沈阳，110031)

目的：建立一种低成本、高通量、简便易行、准确可靠的检测掌跖角化病致病突变的方法。方法:应用高分辨率熔解曲线(HRM)方法检测掌跖角化病患者KRT9基因第一外显子突变情况，并与测序结果进行比较。结果:HRM方法能准确区分野生型和杂合型致病突变536T>C、548A>G，测序结果与 HRM 结果完全一致。结论:HRM方法能简单快速、准确经济地检测KRT9基因突变，能用于掌跖角化病患者的大样本临床初筛。

掌跖角化病；高分辨率熔解曲线；角蛋白9

掌跖角化病(PPK)是一组以手掌和足跖角化过度为特点的慢性皮肤病。大多为遗传性, 有家族史，按遗传方式可分为常染色体显性遗传类型,如表皮松解性掌跖角化病(EPPK, OMIM 144200)、Greither病、掌跖角化病伴发食管癌等,和较为罕见的常染色体隐性遗传类型,如Meleda 病、Papillon-lefevre综合征等。其中,EPPK较为常见, 表现为弥漫性、斑块状、有清晰红色边缘的角质增厚, 表面光滑、色黄, 局限在掌跖处的皮肤病变。Reis等[1-2]首次将与EPPK相关的基因定位在染色体17q12-q21上，并在位于该区域的角蛋白9基因(KRT9)中检测到一个点突变R162W。迄今为止，国内外研究人员已经在不同的EPPK家系中检测到了20多种不同的突变, 绝大多数突变集中于KRT9 基因第1外显子区域，此区域成为EPPK的突变热点区。目前，检测基因突变的方法很多，如PCR产物直接测序法、PCR-Taqman探针法、PCR-单链构象多态性分析法、突变特异性扩增系统等。这些……