细胞周期激酶亚单位1对肝细胞癌细胞增殖能力的影响

2016-08-15金宇霆张江武昊宇夏强

肝脏 2016年7期

关键词：检测

金宇霆　张江　武昊宇　夏强

细胞周期激酶亚单位1对肝细胞癌细胞增殖能力的影响

金宇霆张江武昊宇夏强

目的观察细胞周期激酶亚单位1(CKS1)在肝细胞癌及正常肝组织中的表达以及其对人肝细胞癌细胞BEL-7405的增殖能力的影响。方法应用免疫组织化学检测65对手术肝细胞癌组织及癌旁正常组织CKS1的表达水平。应用Western印迹检测肝癌细胞系与正常肝脏细胞中CKS1表达量的差异。应用小干扰RNA(siRNA)技术转染肝细胞癌BEL-7405细胞，Western印迹检测CKS1 siRNA对CKS1蛋白的干扰效果，同时应用细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆增殖实验检测CKS1对BEL-7405细胞增殖能力的影响。结果免疫组织化学染色结果显示，CKS1在正常肝组织中表达量较肝细胞癌组织中表达量低，且差异有统计学意义(P<0.05)。Western印迹检测表明CKS1在7种肝细胞癌细胞系表达量显著高于正常肝细胞株，且CKS1的表达量在肝细胞癌BEL-7405细胞株显著高于其他肝癌细胞株。CCK-8法检测CKS1的siRNA转染BEL-7405细胞与阴性对照组和空白对照组相比明显抑制细胞增殖，在48、72和96 hA值分别降低了0.376、0.566、0.972(P<0.05)；平板克隆增殖形成实验表明，CKS1的siRNA转染BEL-7405细胞后肿瘤细胞形成的克隆增殖集落明显少于阴性对照组和空白组,干扰组与空白、阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论CKS1在肝细胞癌组织中表达量显著高于正常肝组织，在肝癌细胞中表达量显著高于正常肝细胞， CKS1在肝细胞癌细胞BEL-7405的增殖中扮演了重要的角色，CKS1可能成为针对肝细胞癌基因治疗的新兴靶点。

肝细胞癌；细胞周期激酶亚单位1； siRNA干扰；细胞增殖

研究表明，肿瘤的发生、发展与细胞周期紊乱密切相关，细胞周期激酶亚单位(Cyclin kinase subunit，CKS)家族蛋白是真核生物在进化中相对保守的小分子蛋白，高等真核生物表达CKS1和CKS2两种蛋白，该蛋白与细胞周期功能相关[1]。CKS家族蛋白通过影响S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)的活性，导致肿瘤抑制蛋白p27泛素化，结合CKS1蛋白促进增殖分化、抗凋亡[2-5]，可能也参与了恶性肿瘤的发生、进展过程。本研究采用免疫组织化学技术和Western印迹法检测HCC组织和细胞与正常肝脏组织和肝细胞的表达分布，同时应用体外化学合成的CKS1 siRNA转染人HCC细胞BEL-7405，探讨其对HCC增殖能力的影响及其作用机制。