何　欢，陈新诺，曾　泽，任玉鹏，汤　承，张　斌，岳　华

(西南民族大学生命科学与技术学院，成都 610041)



副猪嗜血杆菌OmpP2刺激猪肺泡巨噬细胞炎性因子mRNA转录及致炎机制初步分析

何欢，陈新诺，曾泽，任玉鹏，汤承，张斌*，岳华*

(西南民族大学生命科学与技术学院，成都 610041)

摘要：为了研究副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，HPS)弱毒株11型H465株OmpP2刺激猪肺泡巨噬细胞(PAMs)炎性因子mRNA的转录和对NF-κB和MAPKs信号通路的影响，提取并纯化HPS血清11型H465株的OmpP2，分别用5、10 μg·mL-1OmpP2刺激PAMs 6、12 h后收集细胞，提取总RNA和蛋白质。将提取的RNA反转录成cDNA，运用RT-PCR检测炎性因子(IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α)mRNA转录水平。利用Western blot方法检测ERK1/2、JNK、P38、P65和IκBα蛋白表达量的变化。结果表明：HPS H465株的OmpP2能够显著地诱导IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA转录水平上调(P<0.05)，同时能够引起JNK、P65蛋白表达水平显著升高和 IκBα 蛋白表达水平显著降低 (P<0.05)。上述结果证实了HPS 血清11型H465株的OmpP2能够通过调节MAPKs信号通路中JNK蛋白以及NF-κB信号通路中P65蛋白和IκBα蛋白降解促进炎性因子IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的转录。

关键词：副猪嗜血杆菌；OmpP2；炎性因子；NF-κB和MAPK信号通路

副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis，HPS)是猪上呼吸道的一种共栖菌，在特定的条件下侵入机体而引起严重的全身性疾病，以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为主要特征的革拉泽病(Glässer’s disease)[1]。该病已成为全球范围内影响养猪业的一种重要细菌性疾病。根据热稳定抗原和琼脂扩散的方法，HPS至少可分为15个血清型，1、5、10、12、13和14型毒力最强，2、4和15型为中等毒力菌株，血清型3、6、7、8、9和11型为弱毒力菌株，还有一些不定型的菌株[2]。HPS的毒力因子和致病机制一直都是研究热点，HPS OmpP2是含量最为丰富的外膜蛋白，属于微孔蛋白，也是受关注度最高的外膜蛋白[3]。研究发现HPS OmpP2蛋白的序列具有丰富的遗传多样性，存在两种结构类型，即参考菌株中强毒力的血清型菌株中OmpP2基因存在两处连续碱基缺失，而参考菌株无毒力菌株中OmpP2基因没有出现这种缺失情况，暗示了这种缺失现象主要出现在强毒力血清型的菌株中[4]。……