伍昌华，陈绍品，温贵兰，李　晨，李天珍，林汉卿，管国丹，王开功，文　明，龚新勇

(贵州大学动物科学学院 预防兽医学实验室，贵阳 550025)



基于倒毛鸡LSm14A分子序列分析的原核表达与免疫原性分析

伍昌华，陈绍品，温贵兰*，李晨，李天珍，林汉卿，管国丹，王开功，文明，龚新勇

(贵州大学动物科学学院 预防兽医学实验室，贵阳 550025)

摘要：旨在探明倒毛鸡LSm14A分子序列特征与免疫原性。通过提取倒毛鸡肝总RNA，经RT-PCR分别扩增倒毛鸡LSm14A全长CDS区与原核表达片段；采用分子生物学技术构建携带倒毛鸡LSm14分子的原核表达质粒；经IPTG诱导表达、His-tag镍柱纯化表达的重组蛋白质；纯化重组蛋白质rHis-cLSm14A分别免疫小鼠与兔制备相应的多克隆抗体；采用间接ELISA与Western blotting方法分析表达蛋白质的免疫原性。结果显示：倒毛鸡LSm14A全长CDS为1 386 bp，与原鸡源LSm14A相似性达100%，与鸭源的LSm14A相似性为95.1%；与鼠、爪蟾、猴、人、猪、鹅源的LSm14A相似性相对较低；鼠源、兔源抗cLSm14A多克隆抗体ELISA效价均高于1∶3 200；Western blotting结果显示，重组表达蛋白质分别被His抗体、鼠源与兔源抗cLSm14A多克隆抗体所识别，蛋白质条带大小约为19.6 ku。以上结果说明倒毛鸡源LSm14A分子具有较高的保守性与良好的免疫原性，研究结果为研究倒毛鸡的生物学特性与宿主的抗病毒天然免疫机制奠定了基础。

关键词：倒毛鸡；cLSm14A；免疫原性

Sm(Smith)蛋白家族最早在研究人类前体RNA的加工过程中被发现，参与前体RNA的加工[1]。从原核生物到真核生物的多种生物体内还发现多种含Sm基序的高度保守的同源蛋白质家族，称之为Sm样蛋白(Sm-Like，LSm)[2-3]。LSm蛋白是RNA结合蛋白，不同的LSm蛋白在生物中分布广泛，参与多种RNA代谢过程[4-5]。……