周　芳，岳　华，张　斌，李　凡，陈　曦，汤　承

(西南民族大学生命科学与技术学院/四川省教育厅重大动物疫病防控技术创新团队，成都 610041)



牦牛轮状病毒VP6基因序列分析及RT-PCR检测方法的建立与应用

周芳，岳华，张斌，李凡，陈曦，汤承*

(西南民族大学生命科学与技术学院/四川省教育厅重大动物疫病防控技术创新团队，成都 610041)

摘要：轮状病毒(rotavirus，RV)VP6基因是RV的主要分子检测靶点，但该基因的点突变会影响RV的分子检测。本试验的目的是在研究牦牛RV VP6基因遗传变异的基础上，建立检测牦牛RV的RT-PCR方法并应用于临床样本检测。采用Prime 5.0设计引物，从30个牦牛腹泻样本中扩增得到14个位于931—1 338 bp牦牛RV VP6基因片段。序列分析结果发现，与牛轮状病毒(bovine rotavirus，BRV)相比，牦牛RV VP6基因在931—1 110 bp间出现多处点突变，而在1 100—1 338 bp之间序列高度保守。据此设计检测引物，成功建立了检测牦牛RV的RT-PCR方法，具有良好的特异性和稳定性，只扩增出牦牛RV及BRV的特异片段，对其他无关病原无扩增；检测下限为0.45 pg·μL-1，灵敏性较好。所建立方法对牦牛RV的检出率明显优于现有检测BRV的RT-PCR方法，为牦牛RV病的诊断和流行病学调查提供了可靠的方法；对BRV的检出也与其他方法具有很好的符合率，也可以用于BRV的检测。对234份犊牦牛腹泻粪便样本的RV检出率：西藏为60.00%(36/60)、青海为95.00%(57/60)；四川为85.19%(46/54)；云南为90.00%(54/60)，证明牦牛RV感染是当前导致犊牦牛腹泻的重要原因。

关键词：牦牛；轮状病毒；VP6基因；点突变；RT-PCR

国内外研究表明，牛轮状病毒(bovine rotavirus，BRV)是引起犊牛腹泻的主要病因，世界范围内流行，给全球养牛业带来巨大的经济损失[1-2]。……