徐慧慧 赵宏艳 王贵 黄晶 郭明慧 肖诚

1. 北京中医药大学，北京 100029 2. 中日友好医院临床医学研究所，北京 100029 3. 中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700

波尔定(Boldine)是从豆豉姜中提取的一种阿朴菲类异喹啉生物碱，豆豉姜为山鸡椒Litseacubeba(Lour)Pers.的根及根茎, 是治疗风湿痹症的常用药之一，已有研究证明其对完全弗氏佐剂诱导的关节炎大鼠具有较好的抑制作用[1]。课题组前期研究显示波尔定可以改善II型胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis, CIA)大鼠骨微结构[2]，对CIA大鼠引起的骨质疏松具有较好的抑制作用，但具体作用机制尚未明确。

正常的骨代谢依赖着骨吸收与骨形成的平衡，若这一过程受到破坏，骨吸收速度大于骨形成，则会引起骨量的丢失。破骨细胞(osteoclast，OC)在骨吸收这一环节扮演着重要角色，其成熟过程与功能的正常与否将会直接影响体内的骨量，从而进一步影响骨组织的微观结构。所以本课题通过体外培养OC的方法，观察波尔定对OC的分化功能及骨吸收功能的影响，以期探索波尔定改善骨组织微观结构的作用机制。

1 材料

1.1 细胞株

小鼠单核细胞RAW264.7细胞株购自北京协和医学院基础医学细胞中心。

1.2 试剂

高糖DMEM培养基、青霉素、链霉素，美国Gibco公司；胎牛血清(FBS)，美国BioTech公司；小鼠重组核因子κB受体活化因子配基(RANKL)，美国Peprotech公司；牛骨片，英国Immunodiagnostic Systems Limited公司；RIPA裂解液，美国Cell Signaling Technology公司；酒石酸钠，国药集团化学有限公司；抗酒石酸磷酸酶(Tartrate Resistant Alkaline Phosphatase，TRAP)试剂盒、甲苯胺蓝及磷酸对硝基苯酯，美国sigma公司；Trizol试剂，美国life technologies公司；CCK-8试剂盒，日本DOJINDO公司；引物合成，美国Invitrogen公司；……