韩杨，孙同韦，刘会杰，郭伟，王洪彬，刘逸寒，路福平（天津科技大学生物工程学院，天津300457）



毕赤酵母表达蒜酶及其体外抗氧化功能研究

韩杨，孙同韦，刘会杰，郭伟，王洪彬，刘逸寒，路福平*
（天津科技大学生物工程学院，天津300457）

摘要：从大蒜鳞茎中克隆蒜酶基因，构建蒜酶真核表达载体，并在毕赤酵母系统中诱导表达，探讨重组蒜酶的活性及其催化蒜氨酸分解产生蒜素的抗氧化活性。利用RT-PCR方法克隆大蒜鳞茎蒜酶基因，通过pPIC9K载体构建pPIC9K-alliinase真核表达质粒，电转化法导入毕赤酵母GS115，筛选阳性克隆，经甲醇诱导后取发酵上清液进行SDSPAGE分析。利用丙酮酸法检测重组蒜酶的活性。并采用DPPH·法，分别研究有氧及无氧条件下蒜酶催化蒜氨酸分解产生蒜素的抗氧化活性。从大蒜中克隆出蒜酶基因，重组酶存在于毕赤酵母表达上清液中，形成糖蛋白，酶的比活力为（115.81±1.93）U/mg；无氧条件下蒜酶催化蒜氨酸分解产生蒜素的抗氧化能力高于有氧条件。克隆了蒜酶编码基因，并成功实现在毕赤酵母中的有效表达。无氧条件下蒜酶催化蒜氨酸分解产生蒜素抗氧化能力比有氧条件下高，为体内利用蒜酶和蒜氨酸制备高抗氧化能力的制剂提供基础。

关键词：蒜酶；毕赤酵母；蒜氨酸；抗氧化

在现代医学领域中，人们对抗氧化剂的研究越来越多。众所周知，适当补充外源抗氧化剂，或给予能够促使机体内源性抗氧化物恢复到一定水平的药物，可改善衰老以及疾病的情况［1］。

大蒜（Allium sativum L.）又名胡蒜、独蒜等，单子叶植物百合科葱属植物，为香辛类蔬菜。……