刁迎斌　高惠娟　袁辉　付鸿玉

[摘要] 目的 探讨血清视黄醇结合蛋白（RBP）、胱抑素C（CysC）、血管内皮生长因子（VEGF）在糖尿病肾病（DN）中的变化及意义。 方法 将124例2型糖尿病患者（DM）根据24 h尿微量白蛋白排泄率（UAER）随机分为正常白蛋白尿（NA）组35例，微量白蛋白尿（MA）组45例和临床白蛋白尿（CP）组44例，另选取35名健康体检者为对照组，记录各组临床资料，测定各组生化指标，应用ELISA法测定各组血清RBP、CysC、VEGF水平。结果 NA组、MA组、CP组BMI、腰臀比（WC）、空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2hFBG）、糖化血红蛋白（HbAlc）、餐前C肽（CP）、餐后2 h C肽（2hCP）、胰岛抵抗指数（HOMA-IR）、血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、RBP、CysC、VEGF水平显著高于对照组（P<0.05）。与NA组比，、MA组、CP组BMI、WC、FPG、2 hFBG、HbAlc、CP、2hCP、HOMA-IR、Cr、BUN、RBP、CysC、VEGF水平较高（P<0.05），而CP组血清RBP、CysC、VEGF水平高于MA组。经Spearman单因素分析，RBP与UAER 、BUN、Cr呈正相关（P<0.05），CysC与UAER、BNU、Cr呈正相关（P<0.05），VEGF与HbAlc、HOMA-IR、RBP、CysC呈正相关（P<0.05）。结论 血清RBP、CysC、VEGF水平与DN发生有密切的关系，血清RBP、CysC、VEGF水平可作为DN早期诊断指标。

[关键词] 血清视黄醇结合蛋白；胱抑素C；血管内皮生长因子；糖尿病肾病

[中图分类号] R587 [文献标识码] A [文章编号] 1672-4062（2016）03（b）-0131-04

糖尿病肾病（DN）是2型糖尿病（T2DM）常见的并发症，目前普遍认为炎症因子与内分泌、免疫系统、氧化应激、脂肪代谢异常等因素相互作用引起的细胞结构异常及胰岛素抵抗及微血管病变有关[1-2]。近年研究指出[3]，血清视黄醇结合蛋白（RBP）、胱抑素（CysC）可作为肾功能损伤的早期评价指标。血管内皮生长因子（VEGF）与糖尿病微血管病变发生及进展有密切的关系。该研究将应用ELISA法测定DN患者中血清RBP、CysC、VEGF水平，并分析其在DN早期诊断中的变化及意义，旨在为DN早期防治提供指导，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院2014年6月—2015年6月收治的124例Ⅱ～Ⅳ期DM患者为研究对象，纳入标准：①均美国糖尿病协会及我国糖尿病协会2009年制定的DM诊断标准；②均签署知情同意书；③所有病例均经该院医学伦理委员会审批。排除标准：恶性肿瘤、自身免疫系统性疾病、外伤性感染、心血管疾病、肝肾功能不全的患者。根据24 h尿微量白蛋白排泄率（UAER）随机分为正常白蛋白尿（NA）组35例：空腹血糖>8.26 mmol/L，尿蛋白<30 mg/24 h；微量白蛋白尿（MA）组45例：空腹血糖>8.26 mmol/L，尿蛋白32～232 mg/24 h；临床白蛋白尿（CP）组44例：空腹血糖>8.26 mmol/L，尿蛋白500～658 mg/24 h。另选取35名健康体检者为对照组，患者入组时均经相关检查排除肾脏不全者，其余排除标准与DN组相同。

1.2 主要仪器及试剂

标准软皮尺、水银液压计、7600-010型日立全自动生化分析仪、RBP、CysC、VEGF等试剂盒、德国ACCU-CHEK血糖仪、ELISA-STAR全自动酶标分析仪。

1.3 测定方法

1.3.1 腰围、体重、血压指数测量 被测量者取垂直站立姿势，双足自然分开30 cm左右，使体重均匀分布，平稳呼吸；检查者用一个没有弹性、最小刻度为1 mm的软尺，在腋中线髂嵴和第12肋下缘连线的中点，沿水平方向围绕腹部一周，紧贴而不压迫皮肤进行测量， 松紧以能够窜动皮尺而皮尺不脱落为准。测量值精确到1 mm。体重指数（BMI）=体重（kg）/身高（m2）。血压测量：采用标准欧姆龙上臂式电子血压计测量血压，受试者在安静状态下，取坐位，并连续测量右上臂动脉血压3次，取3次平均值。

1.3.2 生化指标测定 各组均于清晨空腹抽取静脉血3 mL，经离心处理后留取血清，应用7600-010型日立全自动生化分析仪测定甘油三脂（TG）、总胆固醇（TC）、低密度蛋白（LDL-C）、高密度蛋白（HDL-C）水平，应用德国ACCU-CHEK血糖仪测定各组空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2hFBG）。放射免疫法测定空腹胰岛素（FINS）水平，计算胰岛抵抗指数（HOMA-IR），HOMA-IR=FINS×FBG/22.5。C肽采用胰岛素C肽释放试验进行测试，毛细管电泳法测定各组HbA1c。

1.3.3 血清RBP、CysC、VEGF水平测定 空腹抽取各组静脉血3 mL，以3000 r/min离心处理样本后留取上清液，应用ELISA法测定三组血清RBP、CysC、VEGF水平，RBP试剂盒由上海一研生物科技有限公司提供，CysC试剂盒由上海拜力生物科技提供，VEGF试剂盒由上海基免实业有限公司提供，操作过程严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.4 统计方法

计量资料指标均进行正态性及方差齐性检验，符合正态分布的数据以均数±标准差（x±s）表示，计数资料以频数和百分数表示。计量资料样本均数的比较采用t检验，计数资料样本采用χ2检验，单因素分析采用Pearson相关分析，多因素分析采用Logistic多因素分析。用SPSS 19.0统计学软件包进行处理，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 DN组、DM组及NC组相关资料对比

MA组、CP组BMI、WC、FPG、2 hFBG、HbAlc、CP、2 hCP、HOMA-IR、Cr、BUN、RBP、CysC、VEGF水平显著高于NA组及对照组（P<0.05）。MA组、CP组BMI、WC、FPG、2 hFBG、HbAlc、CP、2 hCP、HOMA-IR、Cr、BUN、RBP、CysC、VEGF水平较高NA组（P<0.05），而CP组血清RBP、 CysC、VEGF水平高于MA组，见表1。

2.2 血清RBP、CysC、VEGF与相关指标的的Spearman相关分析

经Spearman单因素分析，RBP与UAER 、BUN、Cr呈正相关（P<0.05），CysC与UAER、BNU呈正相关（P<0.05），VEGF与HbAlc、HOMA-IR呈正相关（P<0.05），见表2。

3 讨论

RBP是血液中维生素A转运蛋白，主要由肝脏、脂肪组织合成，广泛分布在人体脑脊液、体液及血清中。RBP作为小分子蛋白，可自由滤过肾小球，血液中RBP可与甲状腺素转运蛋白、视黄醇结合形成聚合物，该聚合物能降低RBP在肾小球的滤过及肾脏的分解[4]。在正常生理状态下，肾小球基底膜会自动调节血清中RBP水平，使得血清RBP水平稳定[5]。DN基本病变为肾系膜基质增生或肾小球基底膜增厚，使得肾血流量减慢及肾小球滤过率降低，导致RBP在血液中蓄积，使得血清中RBP水平升高[6]。尿液中RBP排出量取决于肾小管重吸收能力，DN患者由于肾小管损伤，重吸收能力下降，肾小管对RBP吸收量减少从而导致尿液中RBP水平升高[7]。该研究中MA组、CP组血清RBP水平高于高于NA组及对照组，而CP组血清RBP水平高于MA组，且RBP与UAER 、BUN、Cr呈正相关（P<0.05）。Chu等[8]研究指出，RBP可作为糖DN早期病变诊断指标。Toruner等[9]也认为RBP联合肾功能指标联合检测可提高早期DN诊断准确率。这表明RBP水平与肾脏损伤有密切的关系，且这种损伤可能出现在肾功能病变的早期，并随着患者病情发展有密切的关系。因此血清中RBP水平不仅能有效反映DN患者肾功能损伤程度，同时也可作为DN预后的评价指标。

CysC属于非糖基化小分子半胱氨酸蛋白酶，是反映肾小球滤过率的理想内源性标志物[10]。CysC无组织特异性，正常状态下血清CysC水平稳定，即使在炎症状态下血清中CysC水平不会发生较大的变化，其生成不受机体急性反应、肌肉量、患者性别、年龄、肿瘤、内分泌及免疫性疾病影响[11]。肾脏是清除CysC唯一的器官，当肾小球滤过功能受损时，CysC在近曲小管中会重吸收及降解功能将受阻，使得CysC不能被排出，导致血液中CysC蓄积，使得血液中CysC水平升高[12]。该研究结果显示，该研究中MA组、CP组血清CysC水平高于高于NA组及对照组，而CP组血清CysC水平高于MA组，CysC与UAER、BNU呈正相关（P<0.05），这提示CysC水平可反映DN患者肾功能病变情况，且随着DN患者肾功能病程的加重其水平显著升高，可作为DN早期肾功能损伤及预后的评价指标。

VEGF属于特异性极强的血管内皮生长因子，可刺激血管内皮细胞分裂及增殖，增加血管内皮通透性，促使内皮细胞增殖、迁移，促进细胞外基质堆积，从而参与DN生理病理过程[13]。VEGF受体主要表达于皮质间质细胞、肾小球内皮细胞、管旁毛细血管中。在糖尿病发病相关因素如胰岛素抵抗、高血糖、炎症因子等均可上调VEGF。该研究中MA组、CP组血清VEGF水平高于高于NA组及对照组，而CP组血清VEGF水平高于MA组，且VEGF与HbAlc、HOMA-IR呈正相关（P<0.05），这提示VEGF水平与糖尿病肾病病情发生及进展有密切的关系，结果与Oltean等[14]一致。VEGF水平与HbAlc呈正相关进一步支持了DN患者持续高血糖状态对VEGF有上调作用的观点。有研究指出，血液中高浓度VEGF可促进肾小球血管内皮细胞分裂、增殖，同时促进前列腺素、纤溶酶原释放，改变内皮细胞窗孔及改变肾脏血流动力学，增加血管通透性。这也可能是VEGF在DN患者中的作用机制。

综上所述，血清RBP、CysC、VEGF水平与DN发生有密切的关系，血清RBP、CysC、VEGF水平可作为DN早期诊断指标。

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（收稿日期：2015-11-27）