陈 艳，严必中，陈 平，宋俊彪，胡 平，卞伟刚

(江苏省盐城市第一人民医院，江苏 盐城 030000)

胃癌患者乳腺癌易感基因1与X射线修复交叉互补基因1的表达及其奥沙利铂辅助化疗效果分析

陈 艳，严必中，陈 平，宋俊彪，胡 平，卞伟刚

(江苏省盐城市第一人民医院，江苏 盐城 030000)

目的 探讨胃癌术后乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1，BRCA1)及X射线修复交叉互补基因1(X-ray repair cross complementing gene 1，XRCC1)表达及其奥沙利铂辅助化疗效果。方法 选取74例术后病理诊断为胃癌患者，均予奥沙利铂辅助化疗。采用免疫组化法检测病理标本中BRCA1和XRCC1的蛋白表达情况。结果 74例患者胃癌组织内XRCC1 及BRCA1蛋白表达的阳性率分别为18.9%(14/74)、29.7%(22/74)；BRCA1与XRCC1表达呈正相关(r=0.264，P= 0.012)；BRCA1及XRCC1蛋白表达阳性患者化疗有效率以及3年无病生存率(diseasefree survival，DFS)和总生存期率(overall survival，OS)均低于蛋白表达阴性患者，差异均有统计学意义(P< 0.05)。BRCA1和XRCC1蛋白的表达及肿瘤分化程度是胃癌患者术后化疗3年OS的独立因素。结论 胃癌患者BRCA1和XRCC1蛋白的表达是影响患者预后的关键因素，且影响术后辅助化疗的治疗效果。临床上，可根据其表达水平选取化疗药物。

胃癌；BRCA1；XRCA1；奥沙利铂；辅助化疗；相关性分析

胃癌是中老年人好发的常见肿瘤之一，其发病隐匿，患者多无临床症状，发现时大部分为晚期胃癌[1]。目前胃癌的治疗还是以手术切除为主的综合治疗，化疗作为主要的辅助治疗方式。随着基因组学研究的深入，越来越多的人认为，基因的改变及变化在胃癌的发生发展过程中占主导地位[2]，相关基因表达的高低决定着患者胃癌发病率的高低及其发病后的药物敏感性以及术后生存率。有学者在胃癌标本中发现胃癌术后乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1，BRCA1)和X射线修复交叉互补基因1(X-ray repair cross complementing gene 1，XRCC1)的蛋白表达较正常胃组织高，但其表达高低对奥沙利铂辅助化疗的疗效以及患者远期预后的报道尚不多见。本研究对74例胃癌患者的BRCA1和XRCC1蛋白的表达进行检测，探讨其与奥沙利铂辅助化疗效果的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取自2011年3月至2014年5月在我院行胃癌根治术的患者74例，其中男43例，女31例，年龄43～67[(52.3±5.8)岁]；其中管状腺癌21例，印戒细胞癌12例，乳头状腺癌24例，腺鳞癌3例，黏液腺癌14例。

1.2 化疗方案 所有患者在诊断为胃癌的7 d内由同一医师行胃癌根治术，并于术后予以奥沙利铂+卡培他滨方案化疗，第1天按患者的体表面积给予奥沙利铂(江苏奥赛康药业股份有限公司提供，国药准字H20064296)130 mg/m2静注2 h；按患者体表面积给予卡培他滨(Hoffmann-La Roche Inc提供，国药准字J20080101)1250 mg/m2，2次/天，早晚各一次，连续服用两周，停药一周，按此剂量3周重复一次，记为一个周期。所有患者均按此方法治疗两个周期。接受治疗后，采用电话或门诊的方法对所有患者随访3年。

1.3 检测方法 采用免疫组化法对所有患者术后胃癌组织标本中的BRCA1和XRCC1蛋白的表达进行检测。以PBS液代替一抗作为阴性对照。XRCC1抗体购自上海安研生物有限公司，规格：0.1 ml，0.2 ml；浓度：1 mg/ml；BRCA1抗体购自上海瑞齐生物科技有限公司，蛋白分子量81/205 Da，浓度：1 mg/ml；免疫组化试剂盒购自上海经科化学科技有限公司。

1.4 结果判定 ①BRCA1和XRCC1蛋白表达阳性的判断标准[3]：阳性细胞是指在显微镜下观察到细胞核内有棕黄色颗粒的细胞。细胞核内见明显棕褐色颗粒记为3分，棕黄色颗粒记为2分，淡黄色颗粒记为1分，无颗粒沉着记为0分；任意选取5个高倍镜视野，所观察到的阳性细胞所占同类细胞的百分比>75%记为4分，在51%～75%之间记为3分，在26%～50%之间记为2分，在5%～25%之间记为1分，< 5%记为0分。将两项得分的乘积作为最终得分，≥ 2分为蛋白表达阳性，0～1分阴性。②化疗疗效及预后评价[4]：疾病进展(PD)：出现了新病灶或在原有病灶基础上增加例20%；疾病稳定(SD)：原有病灶大小没有明显增加或减少；部分缓解(PR)：原有病灶减少30%；完全缓解(CR)：原有病灶基本或全部消失。有效率(RR)=CR+PR。总生存期率(overall survival，OS)是指从患者术后开始药物治疗的时间至患者死亡时间，3年无病生存率(diseasefree survival，DFS)是指无病生存的比率[5]。

1.5 统计学方法 采用SPSS 20.0 统计软件包进行分析。相关性采用Spearman 秩和相关分析；采用Kaplan-Meier 法进行生存分析；多因素分析采用 COX 回归模型。P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 BRCA1和XRCC1在胃癌患者术后的表达 胃癌组织中的BRCA1和XRCC1免疫组化检测结果见图1、图2。BRCA1、 XRCC1蛋白表达阳性率分别为29.7% (22/74)和18.9%(14/74)。BRCA1和XRCC1的蛋白表达均为阳性者有8例(10.81%)，均为阴性者有46例(62.16%)，BRCA1蛋白阳性而XRCC1蛋白阴性者有14例(18.92%)，BRCA1蛋白阴性而XRCC1蛋白阳性者有6例(8.11%)，二者表达呈正相关(r=0.264，P= 0.012)。

图1 BRCA1蛋白在胃癌中的表达 a：阴性；b：阳性(SP ×200)

图2 XRCC1蛋白在胃癌中表达 a：阴性；b：阳性 (SP ×200)

2.2 临床疗效 BRCA1蛋白表达阳性与阴性患者有效率比较，差异有统计学意义(P= 0.03)；XRCC1蛋白表达阳性与阴性患者有效率比较，差异亦有统计学意义(P= 0.04)，见表1。

表1 胃癌术后BRCA1和XRCC1蛋白表达与化疗疗效

2.3 生存状况 BRCA1和XRCC1蛋白表达阳性患者3年DFS和OS均明显低于表达阴性的患者，差异有统计学意义(P< 0.05)，见表2。

表2 化疗后3年生存状况[n(%)]

2.4 化疗后3年OS的Cox多因素分析 肿瘤分化程度及胃癌患者BRCA1和XRCC1蛋白表达阳性均是化疗后3年OS的危险因素，见表3。

表3 化疗后3年OS的Cox多因素分析

3 讨论

胃癌是我国目前发病率最高的恶性肿瘤之一，其发生与发展是在多种因素的调控下进行的，起病隐匿，早期诊断率低，预后较差，其五年生存率与其他恶性肿瘤相比也较低。在有的国家，针对40岁以上男性，通过在常规体检中加入胃镜检查以提高其早期诊断率，取得了较好的效果[6]。奥沙利铂作为目前较为常用的化疗药物，主要通过阻碍DNA的复制过程，引起肿瘤细胞的凋亡，其对于控制病灶发展、缓解患者症状具有较好的效果。但不同人群对化疗药物的敏感性也不同，对有些患者，行胃癌根治术后辅以奥沙利铂的作用效果远不能达到预期疗效，其疗效具有个体差异性。本研究就探讨了胃癌术后BRCA1和XRCC1的表达与奥沙利铂辅助化疗效果的相关性。

XRCC1是一种作用于DNA的动物基因，位于19号染色体的长臂(q13.2-q13.3)其蛋白分子通过碱基切除修复而在DNA修复中发挥重大作用[7]。有报道称，在患有肺癌、胃癌、神经系统肿瘤的患者中，其XRCC1的蛋白表达异常。方航荣指出[8]，相比较于正常组织，XRCC1蛋白的胃癌组织中的表达更高，差异具有统计学意义。这可能是由于肿瘤在发病过程中，由于某些基因发生异常而造成了大部分细胞的DNA受损，从而使XRCC1的表达上调来修复受损的DNA。其水平可以反映肿瘤组织对铂类药物所致DNA损伤修复的能力。袁张斌认为[9]，XRCC1表达水平较低的患者，辅助奥沙利铂化疗的近期疗效较好。

BRCA1是位于1号染色体上的一种抑癌基因，其表达产物作用于DNA并参与同源重组修复。其蛋白表达的高低可影响作用于肿瘤细胞DNA对化疗药物的敏感性。有报道称[10]，在乳腺癌、胃癌以及卵巢癌中，BRCA1 mRNA的表达高低与铂类药物的疗效以及患者远期生存率有一定的相关性。

在本研究中，BRCA1和XRCC1的蛋白表达呈正相关(r=0.248，P=0.006)，说明两者在胃癌患者起协同作用，共同影响着患者的预后。数据表明，BRCA1和XRCC1蛋白表达阴性患者服用奥沙利铂的治疗有效率高于表达阳性的患者(P< 0.05)，这说明可以根据患者BRCA1和XRCC1的蛋白表达来指导用药。并且BRCA1和XRCC1的蛋白表达阳性与阴性患者化疗3年的DFS和OS比较差异有统计学意义。并且经过Cox多因素分析证实BRCA1和XRCC1表达状况均是化疗后3年OS的危险因素，说明了BRCA1和XRCC1的蛋白表达对患者的远期预后也有一定的影响。

综上所述，胃癌患者术后组织内BRCA1和XRCC1蛋白的表达是影响患者预后的关键因素，也影响着术后辅助化疗的治疗效果，在临床上可根据其表达水平选取化疗药物。

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2015-11-22；

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