杨应松

血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测对地中海贫血患者的诊断价值

杨应松

【摘要】目的 探讨血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测对地中海贫血患者的诊断价值。方法 选取2012年2月至2014年9月在广东省江门市妇幼保健院接受婚检、产检、基因筛查后疑似地中海贫血的386例患者为研究对象，均进行血红蛋白电泳检测，检查结果异常者及不能确诊者行地中海贫血基因检测。比较患者的血红蛋白HbA、HbA2、HbF值及单纯血红蛋白电泳检测和电泳+基因检测对地中海贫血的检出率。结果 通过血红蛋白电泳检测，α-地中海贫血患者HbA、HbA2值明显低于阴性患者，HbF值明显高于阴性患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；β-地中海贫血者HbA值明显低于阴性患者，HbA2、HbF值明显高于阴性患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；电泳+基因检测对α-地中海贫血的检出率明显高于单纯血红蛋白电泳检测的检出率，差异有统计学意义（P＜0.05）。总检出率比较，α-地中海贫血检出率与β-地中海贫血检出率差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测用于诊断地中海贫血准确率高于单纯使用血红蛋白电泳检测技术，具有较高的临床应用价值。

【关键词】血红蛋白电泳；地中海贫血基因检测；地中海贫血；诊断

广东省江门市妇幼保健院，广东江门 529000

地中海贫血最早发现于1925年，是常见的不完全显性单基因遗传性血红蛋白病，多表现为溶血性贫血、代偿性红细胞增多、高铁血红蛋白血症等，其本质是血红蛋白中的一种或几种珠蛋白链缺失或点突变，使血红蛋白组分改变的溶血性贫血，属于先天遗传性疾病［1］。目前，该病尚无根治方法，中重型地中海贫血患者预后不良，所以通过婚前、产前检查等方式对地中海贫血进行筛查和诊断，对该病的防治具有非常重要的意义。目前，临床对于地中海贫血诊断的研究集中于单项检查之间的对比［2］，联合检查方面的研究较少，本研究就血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测对地中海贫血的诊断价值进行探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年2月至2014年9月在我院接受婚检、产检、基因筛查后疑似地中海贫血的386例患者为研究对象，其中男231例，女155例；年龄1.5～56岁，平均（36±14）岁；其中疑似α-地中海贫血患者209例（确诊82例），疑似β-地中海贫血患者177例（确诊39例），确诊后非地贫者纳入阴性对照组（含缺铁性贫血或其他贫血或正常者）265例，所有患者均同意参与本研究，并签署了知情同意书，排除精神疾患或语言障碍不能配合研究、恶性肿瘤的患者。

1.2 检验方法 所有受试者均进行血红蛋白电泳检验，对检查结果阳性及不能确诊的患者行地中海贫血基因检测。

1.2.1 血红蛋白电泳 采集受试者空腹血液，四乙酸二氨基乙烷络合剂（EDTA）抗凝离心（5000 rpm，R=13.5 cm）5 min，去血浆以10倍体积0.9%氯化钠注射液洗涤红细胞3次，取10 μl红细胞加入130 μl溶血液震荡混匀10 s，室温下培育5 min，采用法国西比亚全自动血红蛋白电泳仪、扫描仪和分析系统进行电泳检测，打印图谱。正常参考值：血红蛋白A （HbA）为97%～98%，血红蛋白A2（HbA2）为2.0%～3.5%，血红蛋白F（HbF）为0%～1.0%，且无异常血红蛋白（HbH、HbBart，s）。

1.2.2 基因检测 采集受试者外周血3～5 ml并提取DNA，采用多重聚合酶链式反应（PCR）技术检测3种α缺失型α-地中海贫血和17种β-地中海贫血基因突变位点（按照α-地中海贫血和β-地中海贫血基因诊断试剂盒对应说明书操作）。

1.3 观察指标 记录血红蛋白电泳检测HbA、HbA2、HbF值；同时记录所有受试者血红蛋白电泳检测结果和两种检测方式联合检测的结果，计算比较地中海贫血检出率。

1.4 统计学分析 采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验，计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验，三组比较采用F检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血红蛋白HbA、HbA2、HbF值比较 通过血红蛋白电泳检测，α-地中海贫血患者HbA、HbA2值明显低于阴性患者，HbF值明显高于阴性者，差异有统计学意义（P＜0.05）；β-地中海贫血者HbA值明显低于阴性患者，HbA2、HbF值明显高于阴性者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 血红蛋白HbA、HbA2、HbF值比较（%，±s）

表1 血红蛋白HbA、HbA2、HbF值比较（%，±s）

注：①与②比较，t（HbA）=19.593、t（HbA2）=17.876、t （HbF）=14.928，P＜0.05；①与③比较，t（HbA）=30.219、t （HbA2）=21.674、t（HbF）=19.778，P＜0.05

类别 　HbA 　HbA2　HbF α-地中海贫血（82）　95.3±1.6②　1.5±0.4②　1.3±0.4②β-地中海贫血（39）　93.2±2.1③　4.6±1.0③　5.7±4.3③阴性者（265） 　97.4±0.4①　2.6±0.4①　0.9±0.1①

2.2 血红蛋白电泳与电泳+基因检测的检出率比较 电泳+基因检测对α-地中海贫血的检出率明显高于血红蛋白电泳检测的检出率，差异有统计学意义（P＜0.05）；血红蛋白电泳检测β-地中海贫血检出率与电泳+基因检测检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；总检出率比较，电泳+基因检测检出率高于血红蛋白电泳检测，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 血红蛋白电泳检测与电泳+基因检测的检出率比较［例（%）］

3 讨论

地中海贫血是血红蛋白的珠蛋白肽链基因突变、缺失导致某种珠蛋白肽链合成障碍的遗传性慢性溶血性贫血病，易使患者体内携带和输送氧气的血红蛋白和红细胞减少。通过珠蛋白肽链基因缺陷、缺失程度的差异，可将地中海贫血分为α、β、δα、δβ四种类型，世界范围内比较常见为前两种。在我国，以南方发病率较高，α型地中海贫血及β型地中海贫血携带率分别为10.3%及2.8%。根据病情程度可将地中海贫血分为三级，轻度患者无明显不良反应，中度及重度患者可见乏力、肝脾肿大等症状。地中海贫血是具有严重致死、致残性的遗传性血液病［3］，与患者年龄相关，年龄越大的患者病情加重的危险程度就越高，新生儿重度α地中海贫血通常在出生后2 d内死亡，产妇发生胎儿水肿以及大胎盘等不良事件的概率明显增加，甚至导致死亡［4］。由于目前尚无地中海贫血的根治性治疗方法，所以进行必要的筛查对地中海贫血的诊断、治疗及预后有重要的指导意义。

对于中重型地中海贫血而言，通过患者的临床表现、血红蛋白电泳检测及血流动力学等，可实现准确的诊断，但轻度地中海贫血患者无特异性症状，所以往往容易被忽视，此时需进行基因检测才能避免误诊及漏诊的发生。基因检测是诊断地中海贫血的金标准，随着聚合酶链式反应（PCR）技术的成熟，我国最为常见的三种缺失型α-地中海贫血可被准确检出。但是，基因检测相对复杂、成本高，在大样本筛查中推广难度大，因此还需一定的辅助筛选手段。本研究采取血红蛋白电泳检测，不仅能够对地中海贫血进行筛查，还能进行分型［5］。罗俭权等［6］研究显示，血红蛋白电泳检测对α-地中海贫血确诊符合率为73.81%，对β-地中海贫血确诊符合率为80.58%，能有效筛查出地中海贫血的携带者，为基因检测和遗传咨询提供诊断依据。杨生宙等［7］报道称，血红蛋白电泳检测操作简单、快捷，且价格便宜，临床应用价值高。但多项研究［8-10］显示，血红蛋白电泳检测仅可作为地中海贫血的初步筛查手段。基因检测可同时检测--SEA、-α3.7、-α4等23种缺失型、αCS、αQS、αWS点突变及β地中海贫血17个突变位点，检出无临床症状的静止型α-地中海贫血（αα/-α3.7、αα/-α4.2）、确定具体的基因突变类型，简便快捷，结果直观，多用于婚前、产前检查和诊断［11-12］。诸多学者［13-14］采用基因检测对各地区地中海贫血的基因型及突变类型进行调查分析，为地中海贫血胎儿产检、遗传咨询和基因检测提供参考。李莉等［15］研究显示，基因诊断能准确检出α-地中海贫血、β-地中海贫血和αβ复合型地中海贫血，确诊地中海贫血缺失或突变；苏珊珊等［16］报道称，对孕妇进行地中海贫血基因筛查能有效预防重型地中海贫血胎儿出生。本研究联合上述两种检测方式对疑似患者进行检查，结果显示，单纯血红蛋白电泳与电泳+基因检测对β-地中海贫血的检出率比较差异无统计学意义，血红蛋白电泳检测α-地中海贫血的检出率显著低于电泳+基因检测，表示血红蛋白电泳检测可作为α-地中海贫血患者的初步筛查手段，与基因检测联合检测可提高地中海贫血的检出率。

综上所述，血红蛋白电泳检测联合地中海贫血基因检测用于诊断地中海贫血准确率高于单纯使用血红蛋白电泳检测技术，具有较高的临床应用价值。

参考文献

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The diagnostic Value of Hemoglobin Electrophoresis Combined with Thalassemia Gene Detection in Thalassemia

Yang Yingsong

【Abstract】Objective To study the diagnostic value of hemoglobin electrophoresis combined with thalassemia gene detection in thalassemia.Methods Selected in February 2012 to September 2014 after MCH Hospital of Jiangmen City of Guangdong Province accepted antemarital examination， examination，gene screening suspected thalassemia 386 patients as the object of study，hemoglobin electrophoresis detection and examination results abnormal and could not be confirmed， Mediterranean anemia gene detection.Compare the hemoglobin HbA，HbA2，HbF value of the patients and the detection rate of pure hemoglobin electrophoresis and electrophoresis + gene detection in the detection of the Mediterranean anemia.Results HbA and HBA2 values of patients with α-thalassemia diagnosed by hemoglobin electrophoresis were lower than those of negative ones while HbF values was higher than that of the negative ones （P＜0.05）.HbA values of patients with β-thalassemia were lower than thoae of the negative ones while HbA2 and HbF values were higher than those of the negative ones （P＜0.05）.The detection rates of simple hemoglobin electrophoresis inα-thalassemia （23.44%） and the total detection rate （20.47%） were significantly lowerthan those of electrophoresis combined with gene detection （39.23%，31.35%） （P＜0.05）.Conclusion The accuracy of emoglobin electrophoresis combined with gene detection for diagnosis of thalassemia is higher than that of simple hemoglobin electrophoresis.

【Key words】Hemoglobin electrophoresis；Thalassemia gene detection；Thalassemia；Diagnosis

【中图分类号】R556.6

【文献标志码】A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.06.073

作者简介：杨应松（1985.7-），本科学历，检验师