周海兰李绍鹏李卫亮贺军虎包冬红李茂富

（1. 海南大学园艺园林学院 热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室（海南大学），海口 570228；2. 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，儋州 571737）

油梨基因组DNA提取、SSR-PCR反应体系优化及引物筛选

周海兰1李绍鹏1李卫亮1贺军虎2包冬红1李茂富1

（1. 海南大学园艺园林学院 热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室（海南大学），海口 570228；2. 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，儋州 571737）

旨在建立稳定可靠的油梨（Persea americana Mill）叶片DNA的提取方法和SSR-PCR反应体系及筛选出稳定的油梨SSR多态性引物，为开展油梨种质SSR分子标记提供遗传研究的基础。以油梨叶片为试材，比较3种油梨叶片DNA提取方法；利用L16（45）正交实验设计对油梨SSR-PCR反应体系进行优化；利用优化的反应体系筛选引物；同时，选取5对多态性引物对45份油梨种质进行PCR扩增，进一步检测该优化体系的稳定性。结果表明，常规2×CTAB法、改良2×CTAB法和植物DNA提取试剂盒法等3种DNA提取方法中，改良2×CTAB法对油梨基因组DNA的提取效果最佳；获得最优反应体系为：20 μL总反应体系中，含约40 ng DNA模板、1.5 mmol/L Mg2+、0.15 mmol/L dNTPs、0.5 U Taq DNA聚合酶、0.5 μmol/L引物；以此体系为基础进行引物筛选，从73对油梨SSR引物中筛选出了30对扩增条带清晰的多态性引物，说明该反应体系可用于油梨SSR标记的进一步研究；稳定性检测获得的谱带清晰，表明该优化反应体系是稳定可靠的。由此可见，改良的2×CTAB法可用于油梨叶片DNA的大量样本提取，优化后的SSR-PCR反应体系及筛选出的30对多态性引物可用于油梨SSR标记的进一步研究。……