王海燕朱之轩金晶丁毅

（1. 新疆教育学院科学教育学院，乌鲁木齐 830043；2. 武汉大学生命科学学院遗传学系，武汉 430072）

莲藕根尖染色体制片与免疫荧光染色技术的优化

王海燕1，2朱之轩2金晶2丁毅2

（1. 新疆教育学院科学教育学院，乌鲁木齐 830043；2. 武汉大学生命科学学院遗传学系，武汉 430072）

在细胞遗传学研究中，莲藕根尖染色体制片比较困难，研究了莲藕根尖染色体制片过程中适宜取材的根尖长度、有丝分裂指数、预处理试剂和处理时间、固定时间、酶解与低渗时间等相关因素，并对莲制片进行了免疫荧光染色。结果表明：根尖长为1.5 cm左右时有丝分裂指数最高，预处理采用冰水冷冻处理24 h分裂相较多，染色体形态清晰；用4%多聚甲醛固定1h，染色体形态较好；采用2.5%纤维素酶和2.5%果胶酶混合液37℃消化30 min，酶解较彻底，细胞质残留少，染色体分散良好；1×PBS低渗30 min，染色体形态较好；免疫荧光染色后经检测可观察到较强的信号。

莲藕根尖细胞；预处理；有丝分裂指数；染色体制片；DAPI染色；免疫荧光

莲藕（Nelumbo nucifera）为莲科莲属植物，主要分布在亚洲和大洋洲，也是我国最重要的一种水生经济作物，有食用、药用和观赏价值，也具园林造景和水体净化等环境生态价值。经过长期栽培驯化，已经拥有上百个品种。随着莲藕基因组测序的完成［1，2］，莲藕基因功能鉴定以及表观遗传学研究将成为莲藕基因组研究的重点。免疫荧光染色技术是一种能快速、直观、准确检测目的抗原在细胞内分布的生物技术，其原理是抗原与荧光素标记的抗体直接或间接特异性结合而在荧光显微镜下得以检测［3］。……