席海秀 艾可筠 佟少明

（辽宁师范大学生命科学学院 辽宁省植物生物工程重点实验室，大连 116081）

普通小麦幼苗叶肉细胞原生质体分离方法的优化

席海秀 艾可筠 佟少明

（辽宁师范大学生命科学学院 辽宁省植物生物工程重点实验室，大连 116081）

以7日龄小麦幼苗的叶肉细胞为材料，采用正交试验分析了纤维素酶浓度、离析酶浓度、酶解时间、甘露醇浓度对原生质体分离时的产量和活力的影响；采用瞬时表达技术通过PEG-Ca2+介导法转化小麦的原生质体，分析了PEG浓度对转化效率的影响。结果表明，小麦叶片原生质体分离的最佳条件为纤维素酶1.5%，离析酶 0.75%，甘露醇0.4 mol/L，酶解时间3 h，得到的原生质体的产量可达到7.2×106个/g·FW，活力超过95%；瞬时表达实验结果表明，在25% PEG浓度下，小麦原生质体的转化效率最高。

普通小麦；原生质体；分离；瞬时表达

原生质体是指去除细胞壁的植物细胞，可以同整株植物一样进行正常的生理反应和细胞活动［1］，是多功能的植物遗传改良的重要实验体系之一，在研究细胞生理过程和活动中发挥着重要的作用，如细胞壁的合成，细胞分裂、分化［1］，光合作用［2］，钙离子信号调控［3］，蛋白质亚细胞定位［4］和完整细胞器的分离［5］。应用原生质体为受体进行的遗传操作必须建立在其有效分离的技术基础之上。原生质体分离的方法主要有机械法和酶解法两种，机械法分离原生质体的过程非常复杂且产量低，而酶解法可以在短时间内非常容易地分离出大量的原生质体，因此目前常用酶解法分离原生质体。……