王海东,　胡　忠

1.徐州生物工程职业技术学院, 江苏 徐州 221006;

2.汕头大学生物系, 广东 汕头 515000



利用宏基因组法筛选新几丁质酶基因

王海东1,胡忠2*

1.徐州生物工程职业技术学院, 江苏 徐州 221006;

2.汕头大学生物系, 广东 汕头 515000

摘要：为了寻找新型几丁质酶编码基因，提取了汕头湾海域海底表层沉积物中微生物的宏基因组，采用PCR-DGGE技术扩增和分离获得了新型几丁质酶基因编码信息。实验共得到63条几丁质酶基因片段，其编码的蛋白序列与NCBI数据库收录的序列相似率在41%～97%之间，且大多数在70%以下，只有8条相似率在70%以上，NCBI数据库中与其相似性最高的几丁质酶蛋白序列有18个种属，其中与橙色滑柱菌株 (Herpetosiphon aurantiacus) ATCC 23779的几丁质酶存在着最高相似性的序列有27条，另外，与未可培养细菌几丁质酶基因片段相似的有22条，占34.9%，分属9个种属。说明汕头湾表层沉积物中存在多种几丁质酶编码基因，其中有很多是尚未研究的，为寻找新型的几丁质酶编码基因提供了有力的生物资源。

关键词：汕头湾；几丁质酶；DGGE；宏基因组；表层沉积物

海洋环境中会产生大量的几丁质沉积，所以降解几丁质就成了很多海洋细菌必不可少的特性，几丁质酶基因在海洋细菌中分布十分广泛，几丁质编码基因资源非常丰富，但是99%的微生物都是不可培养的，给获取几丁质基因带来了巨大的困难。采用宏基因组法可以绕过微生物的培养环节直接研究所有微生物的基因信息，通常是构建宏基因组文库，定向筛选……