周启保， 刁晓艳*， 张　颖， 张旺德， 赵孝梅， 官志忠

(1.贵州医科大学附院 心血管内科， 贵州 贵阳　550004； 2.贵州医科大学 分子生物学重点实验室， 贵州 贵阳　550004)



·专题研究·

贵州省汉族原发性高血压CYP17A1基因的多态性*

周启保1**， 刁晓艳1***， 张颖1， 张旺德2， 赵孝梅2， 官志忠2

(1.贵州医科大学附院 心血管内科， 贵州 贵阳550004； 2.贵州医科大学 分子生物学重点实验室， 贵州 贵阳550004)

[摘要]目的： 探讨贵州省汉族原发性高血压(EH)人群CYP17A1基因rs11191548位点多态性。方法： 选取贵州汉族人群的EH患者198例(EH组)和健康体检者199例(对照组)，应用TaqMan探针方法观察两组被检者CYP17A1基因rs11191548位点的基因型及等位基因频率分布。结果： 在EH组和对照组均检测出CYP17A1基因rs11191548位点3种基因型，两组间基因型分布及等位基因频率差异有统计学意义(P<0.05)。结论： CYP17A1基因rs11191548多态性与贵州省汉族人群EH可能相关。

[关键词]高血压； CYP17A1； 基因多态性； 等位基因； 基因型； 汉族； 贵州

原发性高血压(essential hypertension，EH)是一种高发病率的疾病，是导致心脑血管疾病的主要危险因素[1]。EH的发病与遗传因素和环境因素的共同作用有关[2]。已知的相关基因不下200 种,CYP17A1基因为候选基因之一。CYP17A1基因编码细胞色素p450c17alpha蛋白，在类固醇生成途径的调控中起重要作用。目前研究发现CYP17A1在不同地区、不同民族中存在差异[3-8],本研究探讨CYP17A1基因的rs11191548位点基因多态性与贵州省汉族人群EH是否相关。

1对象与方法

1.1研究对象

选择2014年03月～2015年03月心内科门诊及住院的高血压患者198例作为EH组，EH诊断按2010年中国高血压防治指南标准；排除继发性高血压、瓣膜疾病、心肌病及肝、肾衰竭，孕妇、哺乳期妇女以及精神疾病史或滥用药物患者，其中男89例，女109例，平均(54.95±11.06)岁。选择无高血压家族史，无各类心血管、脑血管、肾、内分泌等方面疾病的健康体检者199例为对照组，其中男性87例，女性112例，平均(58.94±11.58)岁。两组被检者在性别分布差异无统计学意义，年龄分布差异有统计学意义。两组均为贵州籍汉族人，且互相均无血缘关系。

1.2方法

1.2.1血压测定采用校正的水银柱式血压计(刻度以2 mmHg为单位)，于上午10∶00～12∶00 测定，测血压前30 min 内禁止吸烟和饮咖啡，避免劳累、紧张和兴奋，静坐5 min，裸露右侧上臂，肱动脉置于和心脏同一水平线位置，每次重复测量3 次，测量相隔5 min/次，取3 次测量的平均值，由专人使用相同血压计测量。

1.2.2基因分型按经典常规法(酚-氯仿法)抽提白细胞DNA，溶于TE；紫外吸收法定量后标化为30 g/L，-40 ℃备用。应用TaqMan实时荧光定量PCR技术对CYP17A1基因rs11191548位点进行基因分型。PCR反应为10 μL体系：DNA(浓度为30 g/L)1.5 μL，通用TaqManPCR Master Mix 5 μL，双蒸水3.25 μL，20×基因分型探针及引物0.25 μL。其中TaqManPCR Master Mix、基因分型探针及引物均购自美国ABI公司，探针分别用FAM、VIC染料标记。反应条件为：60 ℃ 30 s，95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，共55个循环，60 ℃ 30 s，采用美国ABI公司生产的Step one Plus PCR仪，读取FAM/VIC荧光判断基因分析结果。FAM荧光探针识别T等位基因，VIC荧光探针识别C等位基因。每块96孔板设3孔阴性对照，并随机抽取5%样本复测，一致性为100%。

1.3观察指标

对CYP17A1基因rs11191548位点基因型分布进行H-W平衡检验。比较EH组和对照组CYP17A1基因rs11191548位点基因型和等位基因频率。

1.4统计学处理

2结果

2.1CYP17A1基因rs11191548位点基因型分布的H-W平衡检验

注：A、B、C分别为纯合子CC基因型、杂合子CT基因型、纯合子TT基因型图1　CYP17A1基因rs11191548位点基因型实时荧光定量扩增曲线Fig.1　Real-time fluorescence quantitative PCR amplification curves of rs11191548 locus genotype in CYP17A1 gene

EH组和对照组人群CYP17A1基因rs11191548位点均检测出有CC、CT、TT三种基因型。见图1。经χ2检验两组的基因型频率均符合Hardy-Weinberg遗传平衡(P>0.05)。

2.2基因型和等位基因频率分布

经χ2检验两组间基因型分布差异有统计学意义(χ2=9.812，P<0.05)，两组间等位基因频率分布差异有统计学意义(χ2=10.849，P<0.05)，而两组被检者中不同性别人群比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　EH组和对照组CYP17A1基因rs11191548位点的多态性

3讨论

10q24.3区域的CYP17A1基因内的rs11191548位点编码细胞色素P450c17alpha蛋白，介导类固醇17alpha-羟化酶和17,20 裂解酶活性，参与胆固醇前体向雄激素或孕激素以及盐皮质激素或糖皮质激素的转化。CYP17A1基因的突变可损害肾上腺和性腺中类固醇激素的合成,导致17alpha-羟化酶/17,20 裂解酶缺陷症。17alpha-羟化酶缺乏可使孕酮不能转化为17alpha-羟孕酮，以致皮质醇合成不足，促肾上腺皮质激素分泌增加，促使双侧肾上腺增生，同时孕酮、11-去氧皮质酮、皮质酮分泌增加。去氧皮质酮对盐代谢的影响则表现为水钠潴留，血容量增加出现高血压、低血钾等表现[9]。

目前对CYP17A1基因rs11191548多态性与EH关系的研究结果尚不统一。有研究认为不仅在欧美人群，而且在部分非欧美遗传背景的人群中CYP17A1基因的rs11191548多态性与收缩压(SBP)相关[3]。对朝鲜人的研究发现，携带CYP17A1基因C最小等位基因能显著降低SBP、舒张压(DBP)及高血压的患病风险[4]。现国内对该基因的研究结论也不统一，有研究认为该基因rs11191548位点多态性与畲族人群高血压无显著相关[6]。而另一研究认为该基因rs11191548位点与汉族人群高血压的关系密切[8]。

但目前国内对CYP17A1基因rs11191548位点的研究仍很局限，在不同地区、不同民族中缺乏统一认识。因此本研究在贵州省汉族EH人群中对CYP17A1基因附近rs11191548位点单核苷酸多态性进行研究。结果显示，EH组和对照组CYP17A1基因rs11191548位点基因型构成比和等位基因频率之间差异有统计学意义(P<0.05)。与Hong[4]研究结果一致，提示贵州省汉族EH的发病可能与该基因多态性有关。

总之，本研究证实CYP17A1基因rs11191548多态性可能与EH相关。当然还需要大样本量的研究进一步证实上述结果，并从基因方面进一步阐述CYP17A1基因与EH相关性。

4参考文献

[1] Kearnev PM,Whelton M,Revnolds K,et al.Global burden of hypertension:analysis of worldwide data[J].Lancet, 2005(9455):217-223.

[2] Feinleib M, Garrison RJ, Fabsitz R,et al.The NHLBI twin study of cardiovascular disease risk factors: Methodology and summary of results[J].Am J Epidemiol, 1977 (4): 284-285.

[3] Newton-Cheh C，Johnson T，Gateva V，et al．Genome-wide association study identifies eight loci associated with blood pressure[J]．Nat Genet， 2009(6)：666-676．

[4] Hong KW，Jin HS，Lim JE，et al. Recapitulation of two genome-wide association studies on blood pressure and essential hypertension in the Korean population[J]．J Hum Genet， 2010(6)：336-341．

[5] Liu C，Li HX，Qi QB，et al．Common variants in or near FGF5,CYPl7A1 and MTHFR gene are associated with blood pressure and hypertension in Chinese Hans[J]．J Hypertension， 2011 (1)：70-75．

[6] Lin YH,Lai XL,Chen B,et al.Genetic variations in CYPl7Al,CACNB2 and PLEKHA7 are associated with blood pressure and/or hypertension in She ethnic minority of china[J]．Atherosclerosis， 2011 (2)：709-714．

[7] Wu L, Xi B, Zhang M,et al.A sex-specific effect of the CYP17A1 SNP rs11191548 on blood pressure in Chinese children[J].Journal of Human Hypertension, 2012(26):731-736.

[8] Li XM, Ling Y.Common polymorphism rs11191548 near theCYP17A1 gene is associated with hypertension and systolic blood pressure in the han chinese population[J].American Journal of Hypertension, 2013(4):465-472.

[9] 许睿玮,严卫丽.原发性高血压全基因组关联研究进展[J]. 遗传, 2012(7):793-809.

(2015-10-23收稿，2015-12-10修回)

中文编辑： 周凌； 英文编辑： 赵毅

Interrelation betweenCYP17A1 Gene Polymorphisms and Essential Hypertension in Han Nationality of Guizhou Province

ZHOU Qibao1, DIAO Xiaoyan1, ZHANG Ying1, ZHANG Wangde2, ZHAO Xiaomei2， GUAN Zhizhong2

(1.DepartmentofInternalMedicine-Cardiovascular,AffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China； 2.TheKeyLaboratoryofMolecularBiology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To investigate the relationship between rs11191548 loci polymorphisms in CYP17A1 gene with essential hypertension in Han inhabitants of Guizhou province. Methods: TaqMan probe method was utilized to analyze the genotype of rs11191548 polymorphism in CYP17A1 gene, which was performed on 198 selected EH inhabitants as EH group and 199 normal inhabitants as control group. Results: Three genotypes of rs11191548 loci in CYP17A1 gene was detected in both groups. The genotype distribution and allele frequency distribution in two group has statistical difference (P<0.05). Conclusions: The rs11191548 loci gene polymorphism of CYP17A1 may be associated with EH in Han inhabitants of Guizhou province.

[Key words]hypertension; CYP17A1; gene polymorphism; alleles; genotype; Han nationality; Guizhou

[中图分类号]R342; R544.11

[文献标识码]A

[文章编号]1000-2707(2016)01-0005-03

*[基金项目]国家科技支撑计划项目(2013BAI05B03)；贵州省“2011协同创新中心”[黔教合协同创新中心(2014)06号]

**贵州医科大学2013级硕士研究生

***通信作者 E-mail:dxylly@sina.com网络出版时间：2016-01-07

网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160107.2018.034.html