李若梦　吴　凝　赵琳琳　王东生　(中南大学湘雅医院中西结合科，湖南　长沙　410008)



茵陈五苓散对高脂血症大鼠的调脂及抗凝血作用

李若梦吴凝赵琳琳王东生(中南大学湘雅医院中西结合科，湖南长沙410008)

〔摘要〕目的研究茵陈五苓散( YCL)对高脂血症大鼠的调血脂以及抗凝血作用。方法60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、YCL低、中、高剂量组及血脂康组，正常对照组给予基础饲料喂养，其余各组用高脂饲料喂养复制高脂血症模型大鼠，造模成功后给予相应药物治疗，观察各组大鼠血脂、肝肾功能、凝血功能、血液流变学指标的变化情况，ELISA检测组织因子( TF)和组织因子途径抑制物( TFPI)含量。结果经YCL治疗，高脂血症大鼠总胆固醇( TC)、甘油三酯( TG)及低密度脂蛋白胆固醇( LDL－C)均出现不同程度下降，高密度脂蛋白胆固醇( HDL－C)有不同程度升高，全血黏度(高中低切)、血浆黏度、血细胞比容及血小板黏附率降低; YCL各组凝血酶原时间( PT)、活化部分凝血活酶时间( APTT)均有所延长，纤维蛋白原( FIB)下降，TF含量减少、TFPI升高，与正常对照组相比，YCL各组的丙氨酸氨基转移酶( ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶( AST)、尿素氮( BUN)和肌酐( Cr)无明显变化。结论YCL对血脂有较好的调节效果，同时有一定的抗凝血作用，对肝肾功能无明显影响。

〔关键词〕茵陈五苓散;高脂血症;抗凝血作用;血液流变学;组织因子

随着饮食结构和生活习惯的改变，高脂血症现已成为威胁人类健康的重要危险因素之一，它与冠心病、糖尿病等疾病发生发展密切相关。茵陈五苓散( YCL)是张仲景所著《金匮要略》中的经方，在清热利湿退黄治疗肝炎、高胆红素血症等方面成效显著〔1〕。随着人们对该方研究的不断深入，其调脂及抗凝血作用颇受关注〔2〕。本实验拟观察YCL对高脂血症大鼠血脂水平的调节作用，并观察其对凝血功能、血液流变学以及组织因子和组织因子途径抑制物变化的影响。

1材料与方法

1. 1材料

1. 1. 1动物雄性SD大鼠由中南大学湘雅医学院实验动物学部提供，共60只，体重( 200±20) g，动物许可证号: SYXK(湘) 2011－0001。

1. 1. 2主要试剂YCL由中南大学湘雅医院中药房提供，药物组成:茵陈30 g，泽泻15 g，茯苓9 g，猪苓9 g，白术9 g，桂枝4 g。将药材洗净后水煎2次，药液过滤浓缩成每毫升含1 g生药，4℃冰箱保存。血脂康片(北京北大维信生物科技有限公司，国药准字Z10950029) ;胆固醇(北京鼎国生物技术有限责任公司，批号814101100) ;甲硫氧嘧啶(江苏常州国营武进制药厂，批号20020111) ;胆酸钠(北京奥博星生物技术有限公司，批号20080417) ;血脂试剂盒(温州东瓯生物工程有限公司) ; ELISA试剂盒购自美国R＆B公司。

1. 1. 3主要仪器半自动生化分析仪( SS00PP型，法国SECOMAM公司)，全自动血液流变仪( LBY－N6K型，北京普利生公司)，血凝分析仪( CA－7000型，日本Sysmex株式会社)。

1. 2方法

1. 2. 1动物模型制备采用高脂饲养喂饲法进行高脂血症大鼠模型的制备，具体配方: 4%胆固醇、10%猪油、0．2%甲基硫氧嘧啶、0．1%胆酸钠、85．7%基础饲料(其中面粉20%、米粉2%、玉米20%、麸皮25%、豆料20%、骨粉2%、鱼粉2%)。混匀后压制成高脂饲料，饲喂大鼠8 w后，比较模型组大鼠(喂食高脂饲料)与空白组(喂食普通饲料)的总胆固醇( TC)、甘油三酯( TG)、低密度脂蛋白胆固醇( LDL－C)变化，三者出现明显升高提示造模成功。

1. 2. 2动物分组及给药采用随机分组法将雄性SD大鼠分为6组，每组10只。正常对照组给予普通饲料喂养，其余5组大鼠给予高脂饲料喂养制备高脂血症大鼠模型，造模成功后，各组给予相应药物或生理盐水灌胃治疗4 w，按成人用药量和人与大鼠的体表面积比值获得YCL中剂量组大鼠灌胃量，低剂量组用量为中剂量组的一半，高剂量组用量为中剂量组的2 倍:低剂量组灌胃YCL浓缩液4 g·kg－1·d－1，中剂量组灌胃YCL浓缩液8 g·kg－1·d－1，高剂量组灌胃YCL浓缩液16 g· kg－1·d－1;阳性药物对照(血脂康)组:灌胃血脂康(血脂康片溶于生理盐水中配制成100 mg/ml的终浓度灌胃大鼠) 150 mg·kg－1·d－1;正常对照组:灌胃生理盐水2 ml· 100 g－1·d－1;模型组:灌胃生理盐水2 ml·100 g－1·d－1。上述6组的灌胃液体总量一致。

1. 2. 3观察指标各组大鼠在末次给药后禁食12 h，2%戊巴比妥45 mg/kg腹腔麻醉，分离颈静脉，插管取血，分离血清检测血脂、肝肾功能各项指标;收集抗凝血浆检测血液流变学及凝血功能等指标，采用ELISA法测定各组大鼠组织因子( TF)及组织因子途径抑制物( TFPI)表达情况，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1. 3统计学方法采用SPSS19．0软件，计量资料采用±s表示，组间差异采用方差分析。

2结果

2. 1 YCL对高脂血症大鼠血脂代谢的影响与正常对照组比较，模型组大鼠的血脂水平明显增高( P＜0．01)，说明高脂血症模型大鼠造模成功;与模型组相比，YCL低、中、高各剂量组的TC、TG及LDL－C均出现不同程度下降，HDL－C不同程度升高( P＜0．05或P＜0．01) ; YCL中、高剂量组的降脂效果优于血脂康组( P＜0．05)，见表1。

2. 2 YCL对高脂血症大鼠肝肾功能的影响与正常对照组比较，YCL各剂量组的丙氨酸氨基转移酶( ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶( AST)、尿素( BUN)、肌酐( Cr)差异无统计学差异( P＞0．05)，见表2。

2. 3 YCL对高脂血症大鼠血液流变学的影响与正常对照组相比，模型组大鼠的血液流变学指标均严重异常( P＜0．01) ;与模型组相比，YCL低、中、高剂量组的全血黏度、血浆黏度、血细胞及血小板黏附率等各项指标均有所改善( P＜0．05或P＜0．01)，YCL中、高剂量组对血液流变学的改善效果优于血脂康组( P＜0．05)，见表3。

表1各组大鼠血脂变化比较( mmol/L±s，n=10)

表1各组大鼠血脂变化比较( mmol/L±s，n=10)

与模型组比较: 1) P＜0．05，2) P＜0．01;与血脂康组比较: 3) P＜0．05;下表同

组别　TC　TG　HDL－C　 LDL－C正常对照组　1．68±0．382)0．59±0．102)1．52±0．152)1．00±0．132)模型组　2．93±0．20　 1．31±0．18　 0．59±0．13　 1．89±0．16 YCL低剂量组2．35±0．221)1．64±0．121)0．90±0．161)1．46±0．141)YCL中剂量组2．15±0．182) 3)0．82±0．112) 3)1．36±0．112) 3)1．13±0．122) 3)YCL高剂量组2．08±0．122) 3)0．79±0．102) 3)1．30±0．152) 3)1．20±0．192) 3)血脂康组　2．39±0．212)1．01±0．152)1．18±0．142)1．39±0．212)

表2各组大鼠肝肾功能比较(±s，n=10)

表2各组大鼠肝肾功能比较(±s，n=10)

组别　ALT( U/L)　 AST( U/L) BUN( mmol/L) Cr(μmol/L)正常对照组　62．3±6．1　 112．1±17．2　 12．5±2．9　 32．5±2．3模型组　67．8±7．8　 117．6±28．5　 15．4±5．9　 34．1±3．9 YCL低剂量组　65．2±5．5　 109．2±16．3　 13．9±5．3　 32．4±5．9 YCL中剂量组　64．6±4．8　 108．5±21．8　 13．1±4．8　 33．9±3．8 YCL高剂量组　66．4±8．5　 110．1±18．2　 12．0±2．1　 30．1±5．6血脂康组　63．9±5．2　 105．7±20．5　 11．6±2．8　 31．8±7．2

表3各组血液流变学变化比较(±s，n=10)

表3各组血液流变学变化比较(±s，n=10)

组别　　全血低切( mPa·s)全血中切( mPa·s)全血高切( mPa·s)血浆黏度( mPa·s)　血细胞比容( %)　血小板黏附率( %)正常对照组　20．8±5．822)　13．5±2．392)　5．31±0．882)　1．94±0．162)　0．50±0．012)　44．5±1．782)模型组　33．9±8．47　21．6±2．89　6．65±0．74　2．29±0．21　0．56±0．02　57．9±2．11 YCL低剂量组　28．6±5．321)　18．4±2．441)　6．31±0．541)　2．21±0．201)　0．52±0．051)　50．9±3．141)YCL中剂量组　22．1±5．562) 3)　1．54±3．262) 3)　5．50±0．642) 3)　1．93±0．162) 3)　0．49±0．012) 3)　45．8±2．452) 3)YCL高剂量组　23．2±5．782) 3)　1．62±2．562) 3)　5．48±0．532) 3)　1．94±0．432) 3)　0．50±0．022) 3)　45．6±2．032) 3)血脂康组　27．8±6．122)　18．8±3．122)　6．12±0．582)　2．15±0．172)　0．51±0．022)　48．1±1．922)

2. 4 YCL对高脂血症大鼠凝血功能的影响与正常对照组相比，模型组大鼠的凝血功能异常，PT、APTT均下降，FIB上升( P＜0．01) ;与模型组相比，YCL低、中、高剂量组对凝血功能的各项指标均有所改善( P＜0．05或P＜0．01)，其中YCL中、高剂量组对凝血功能的改善效果优于血脂康组( P＜0．05)，见表4。

表4各组凝血功能比较(±s，n=10)

表4各组凝血功能比较(±s，n=10)

组别　PT( s)　APTT( s)　FIB( g/L)正常对照组　18．44±1．122)　37．38±1．232)　2．75±0．282)模型组　10．44±2．12　 21．76±1．49　 4．02±0．16 YCL低剂量组　15．77±1．301)　30．83±2．031)　3．65±0．321)YCL中剂量组　17．78±2．012) 3)33．12±1．782) 3)　3．21±0．262) 3)YCL高剂量组　18．12±1．872) 3)34．52±2．132) 3)　3．03±0．422) 3)血脂康组　14．21±2．391)　31．89±2．111)　3．62±0．391)

2. 5 YCL对高脂血症大鼠TF、TFPI表达的影响与正常对照组相比，模型组的TF表达上升、TFPI表达下降( P＜0．01) ;与模型组相比，YCL中、高剂量组的TF表达有所下降、TFPI表达上升( P＜0．01)，血脂康组并未表现出明显的降低TF或升高TFPI的效果( P＞0．05)，见表5。

表5各组大鼠TF、TFPI表达比较(±s，n=10)

表5各组大鼠TF、TFPI表达比较(±s，n=10)

组别　TF( pg/ml)　TFPI( ng/ml)正常对照组　75．12±1．432)　25．18±2．042)模型组　90．32±2．98　20．12±3．12 YCL低剂量组　87．76±3．47　23．34±1．761)YCL中剂量组　86．16±3．652)　24．65±1．942)YCL高剂量组　85．45±4．532)　24．12±2．082)血脂康组　88．33±3．852)　21．78±3．01

3讨论

高脂血症引发的血液状态异常是并发心脑血管疾病的重要危险因素，由于血液中脂类物质增多能使血管内皮细胞受损，导致血流状态发生改变〔3〕，红细胞、血小板等血液成分集聚性增高，血液黏滞度增高，血流速度减慢〔4〕。由于血管内皮细胞受损，血脂更容易附着在血管壁上，单核细胞吞噬脂类物质引起炎症反应形成脂质核心，导致血管内壁硬化、狭窄，血流量减少、血流速度减慢造成局部微循环障碍，引起凝血因子的活性增强，促使血小板聚集，形成微血栓，导致心脑血管疾病的发生〔5〕。因此，有效的控制血脂水平是改善心脑血管病发生发展的重要手段〔6〕。在血液凝固的过程，血液中的多种凝血因子之间活性失衡。TF是外源性凝血系统的启动因子〔7〕，同时它还可以作为辅助因子参与内源性凝血，其活性异常或表达过度可导致凝血亢进。TFPI是TF的抑制物〔8〕，对维持体内正常的凝血状态起着重要作用。在高脂血症患者体内，二者之间的平衡受到破坏，呈现出血液高凝状态〔9〕。

YCL通过清热利湿来调整体内脂质代谢〔10〕。中医认为高脂血症的形成与痰瘀痹阻、脏腑功能不足有关，嗜食肥甘厚腻、脾胃功能失调、三焦气化失司，从而出现津液代谢异常。水湿代谢出现异常，则易在体内郁而化热，炼津成痰〔11〕，故而可采用清热利湿之法治疗高脂血症。

在本研究中，高脂血症大鼠模型经过YCL各浓度的干预，血脂代谢紊乱现象得到改善，说明调脂作用颇佳，同时能延长高脂血症大鼠PT、APTT及降低FIB含量，改善血液高凝状态。高脂血症大鼠的血液流变学指标异常，表现为血液、血浆黏度增高，YCL各剂量组干预后，血液流变学各项指标均有改善，明显降低血液高黏滞性，并且能有效地降低TF、升高TFPI的表达，具有较好的抗凝血作用，并且临床用药安全性较好。

4参考文献

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8余波，冷希岗．人类组织因子途径抑制因子的研究进展〔J〕．国际生物医学工程杂志，2006; 29( 1) : 25－8．

9马琦琳，孙明，汤参娥．高脂血症患者一氧化氮和组织因子与血管紧张素Ⅱ相关性及通心络干预的疗效〔J〕．医学临床研究，2009; 26 ( 9) : 1659－61，1664．

10林素财，廖芳莲，林琳．茵陈五苓散治疗高脂血症的机理探讨〔J〕．光明中医，2009; 24( 4) : 642－3．

11王东生，周衡，奚彩昆，等．茵陈五苓散治疗高脂血症的临床观察〔J〕．中国医药学报，2001; 16( 5) : 36－9．

〔2015－07－16修回〕

(编辑李相军)

Lipid modulation and anticoagulative function of yinchenwulin powder on hyperlipidemia rats

LI Ruo-Meng，WU Ning，ZHAO Lin-Lin，et al.
Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Xiangya Hospital，Central South University，Changsha 410008，Hunan，China

【Abstract】Objective To investigate the effects of yinchenwulin powder on blood lipids and anticoagulative function of hyperlipidemia rat．Methods Sixty SD rats were randomly divided into normal control，model，three different dosages of yinchenwulin powder( high，middle，low) and xuezhikang groups．The normal control was fed with routine forage，and the others were fed with high fat forage for establishment the hyperlipidemia rats model．The blood lipid spectrum，hepatic and renal function，coagulation function，blood rheology and the contents of tissue factor( TF) and TFPI were measured．Results Compared with those of model group，the levels of TC，TG and LDL in yinchenwulin powder groups( high，middle，low) were decreased，the level of HDL was increased; and the whole blood viscosity，plasma viscosity，hematocrit，and platelet adhesion ratio were decreased; PT and APTT were prolonged; TF was decreased while TFPI was increased．There were no obvious differences between normal group and three different dosages of yinchenwulin powder groups in the hepatic and renal functions．Conclusions Yinchenwulin powder could regulate the blood lipid effectively，and it also has anticoagulative effect，and it has no harm to the hepatic and renal function．

【Key words】Yinchenwulin powder; Hyperlipidemia; Anticoagulative effect; Blood rheology; Tissue factor

通讯作者:王东生( 1964－)，男，博士生导师，教授，主要从事中西医结合心脑血管病防治研究。

基金项目:国家自然科学基金( 81173198)

〔中图分类号〕R28

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202( 2016) 02-0259-03;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2016. 02. 002

第一作者:李若梦( 1983－)，女，博士在读，主治医师，主要从事中西结合心脑血管疾病治疗研究。