王建昌， 胡连霞， 段永生， 李 静， 王金凤

（河北出入境检验检疫局 检验检疫技术中心，河北 石家庄050051）

副溶血性弧菌实时荧光单引物等温扩增方法的建立

王建昌， 胡连霞*， 段永生， 李 静， 王金凤

（河北出入境检验检疫局 检验检疫技术中心，河北 石家庄050051）

以副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）gyrB基因特异序列为靶序列，设计RNA-DNA组合引物和链终止序列，优化反应体系，建立实时荧光单引物等温扩增（Real-time fluorescence single primer isothermal amplification，实时荧光SPIA）检测副溶血性弧菌的方法。实时荧光SPIA在40 min反应时间内，对3株副溶血性弧菌和16株其他食源性致病菌进行实时荧光SPIA检测，结果表明除3株副溶血性弧菌外，其他细菌均未扩增出荧光曲线。进一步研究表明，实时荧光SPIA检测副溶血性弧菌纯培养DNA的灵敏度为8.2 fg/μL，对副溶血性弧菌菌悬液的检测灵敏度为13.5 CFU/mL；对鳕鱼、海蟹、牡蛎和咸鸭蛋等4种模拟样品中副溶血性弧菌的检出限均为14.7 CFU/g。研究结果表明，实时荧光SPIA检测副溶血性弧菌灵敏度高，特异性强，耗时短，方法简便。

实时荧光单引物等温扩增；副溶血性弧菌；gyrB基因

致病性弧菌是一类重要的食源性病原菌[1-2]，广泛地存在于自然水环境，特别是海水中，对海产品有较大程度的污染。在弧菌属中，危害较大或出现频率较高的是O1型霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌[3-4]。副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，VP）最早是由Fujino等[5]于1953年从日本一个食物中毒患者初次分离得到的，是一种革兰氏阴性嗜盐菌，常呈多态性，有鞭毛，无荚膜和芽孢。在含3%～5%的食盐培养基中，pH 7.5～8.5，37℃条件下生长最为良好并且对酸敏感。……