张媛媛，张彬（石家庄学院化工学院，河北石家庄050035）



米曲霉氨基酰化酶的纯化及粗酶性质研究

张媛媛，张彬
（石家庄学院化工学院，河北石家庄050035）

摘要：利用硫酸铵分级盐析法从米曲霉L-09中提取氨基酰化酶，比活力为56.01 U/mg，纯化倍数为2.06，酶活力回收率为80 %。详细研究该粗酶的酶学性质。结果表明，经盐析法提纯的粗酶最适pH为7，最适反应温度为55℃，在55℃下热稳定性良好。溶液中的金属离子对酶活力有很大影响。其中，高浓度的Fe2+、Mn2+和Ca2+对酶活力有抑制作用，低浓度的Co2+离子对酶活力有激活作用。

关键词：氨基酰化酶；纯化；粗酶性质

氨基酸作为一种常见的手性化合物，其生产、应用与人类息息相关。D-氨基酸如D-丙氨酸[1]，D-苯丙氨酸[2]因其重要的生理功能，在医药、食品等行业中都有较好的潜在价值[3]。但D-氨基酸在自然界中含量稀少，直接提取的成本较高，也无法通过发酵法获得，因此使用氨基酰化酶对D，L-氨基酸进行酶学拆分是生产D-氨基酸的行之有效的方法之一[4]。

氨基酰化酶能专一地水解N-酰基-L-氨基酸的酰胺键，获得L-氨基酸，反应物中留下的D-氨基酸可通过化学方法转型或继续拆分[5]。氨基酰化酶广泛存在于动物[6]、植物[7]和微生物细胞[8]中，米曲霉氨基酰化酶是由米曲霉产生的胞外酶。

自60年代末日本将固定化氨基酰化酶成功应用于生产以来，国内有关于该酶固定化的研究报道很多[9-10]。受成本限制固定化氨基酰化酶的出发酶液通常采用盐析等蛋白质初级纯化方法进行处理，所以研究经初步纯化后的粗酶液的酶学性质对于后续的固定化操作有很大意义。……