施春煜

（郑州市第十一中学，河南郑州 450002）

牛奶中β-内酰胺酶半定量快速检测试纸的研究

施春煜

（郑州市第十一中学，河南郑州 450002）

青霉素经β-内酰胺酶分解得到的产物青霉噻唑酸具有还原性，与亚铜试剂发生络合反应生成紫红色络合物，在一定范围内络合物的颜色深浅与β-内酰胺酶的量呈线性关系。将醋酸纤维素膜（CA）作为显色层放在亚铜试剂（2.5%2,2'-联喹啉乙醇溶液与0.2 mol/L CuSO4溶液均匀混合）中浸泡10 min，进行显色反应，45℃下真空干燥30 min，制得β-内酰胺酶半定量快速检测试纸；配制β-内酰胺酶标准品溶液0～250 U/mL（0，6，12，25，50，100，150，200，250 U/mL），在显色层进行显色反应后，利用分光测色仪测定不同梯度下的颜色，得到L*值，a*值和b*值，并应用色彩模块软件进行模拟，按照β-内酰胺酶标准液的浓度梯度进行排列、粘贴，制成β-内酰胺酶标准比色卡。通过试验得出β-内酰胺酶在牛奶样品中最低检出限为6 U/mL，相对误差范围7.51%～15.38%。β-内酰胺酶半定量快速检测试纸具有快速、操作简单、经济实用、易于普及和现场测定的优点。

β-内酰胺酶；快速检测试纸；牛奶

革兰氏阳性菌分泌产生的β-内酰胺酶（βlactamase），具有可选择性酶解牛奶中残留的β-内酰胺类抗生素的能力，通过破坏7-氨基头孢烷酸（7-ACA）和6-氨基青霉烷酸（6-APA） 等结构，进而破坏抗生素并且使酶解后的物质进入奶制品中，酶联免疫法、微生物法等常规检测方法在检测中失效，从而常规方法无法准确检测出是否含有抗生素，掩盖抗生素超标的事实[1-2]。在碱性条件下，β-内酰胺酶与青霉素发生反应，亲核性基团向青霉素内的β-内酰胺环进攻，破坏7-氨基头孢烷酸（7-ACA）和6-氨基青霉烷酸（6-APA）等结构，β-内酰胺环开环后脱羧重排形成中间体青霉噻唑 酸[3-4]。……