沈 朕， 王晓兰， 韩雅萌， 关洪斌

(山东大学 海洋学院， 山东 威海 264209)

3种复方中药饲料添加剂对刺参生长及免疫力的影响

沈 朕， 王晓兰， 韩雅萌， 关洪斌*

(山东大学 海洋学院， 山东 威海 264209)

为中药饲料添加剂在刺参养殖中的应用提供参考，进行了3种复方中药饲料添加剂(A：黄精、灵芝和丹参各3 g，益母草2 g，山楂和甘草各1 g；B：人参9 g，黄芪、淫羊藿、杜仲、枸杞、金银花和马齿苋各6 g，香菇10 g，甘草3 g；C：灵芝和玉竹各15 g，板蓝根、蒲公英和八角茴香各10 g，甘草5 g)对刺参生长和免疫力的影响试验(试验期40 d)。结果表明：复方中药饲料添加剂B、C均能显著提高刺参的生长性能，复方中药饲料添加剂B对于生长性能的促进和提升饵料效率的效果尤为明显，其特定生长率(1.04%/d)和增重率(14.88%)分别为空白对照组的8倍和18倍(P<0.05)，饵料系数降低；复方中药饲料添加剂A、B和C均能显著提升刺参的免疫性能(P<0.05)，以复方中药饲料添加剂B组的免疫指标较突出，超氧化歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)和过氧化氢酶(CAT)活性分别为60.21 U/mL、220.78 U/mL和818.38 U/mL。3种中药复方添加剂均对水质有一定的负面影响，水体中的氨氮、硝氮含量均高于空白对照组，但均明显低于刺参所能承受的最大氨氮值。

海参； 刺参； 中药添加剂； 生长性能； 免疫性能； 水质

海参是棘皮动物门海参纲1 100种无脊椎动物的统称，海参养殖是重要的渔业产业之一。我国的海参品质以黄渤海海域的刺参最佳，经济价值也相对较高[1]。近年来，人们越发重视海参的食补价值，同时对于海参的研究不断加深，海参的需求量不断增大，养殖规模不断扩大，养殖密度增大导致疾病、生长缓慢等问题，因此提升海参的抗病能力和生长性能对其养殖效益的提高具有重要意义。

我国对中草药的研究已有上千年历史，近年来，中草药已被广泛应用于各类养殖业中，尤其是渔业养殖产业。中草药是天然药物，具有无抗药性、无副作用等优点，而且可显著抑制水中致病弧菌的生长[2]，促进鱼类生长及免疫性能提升[3-5]。为寻找适合刺参生长发育及提升其免疫能力的中药添加剂配方，进行了3种复方中药饲料添加剂对刺参生长和免疫力的影响试验，以期为中药饲料添加剂在刺参养殖中的应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 刺参及海水 试验用刺参购买于荣成市宁津海参养殖场，在120 L塑料收纳箱中进行养殖。养殖用水为威海当地海域海水(4—5月盐度31.9‰，pH7.96)，为排除藻类及其他杂质的影响，海水在使用前均静置24 h，并用6层脱脂棉纱布进行过滤。

1.1.2 中药添加剂 试验用中药购于威海颐和堂医药连锁店，烘焙干燥后用高速中药粉碎机(ZN-500A)粉碎，过60目药筛。中药复方添加剂配方：A)黄精、灵芝和丹参各3 g，益母草2 g，山楂和甘草各1 g；B)人参9 g，黄芪、淫羊藿、杜仲、枸杞、金银花和马齿苋各6 g，香菇10 g，甘草3 g；C)灵芝和玉竹各15 g，板蓝根、蒲公英和八角茴香各10 g，甘草5 g。

1.1.3 饲料 饲料配方：紫贻贝粉20%，海带粉20%，海泥54%，酵母粉5%，混合维生素无机盐1%。其中，紫贻贝粉购买自威海家家悦水产部，烘干至恒重后，高速中药粉碎机(ZN-500A)粉碎，过60目筛；海带粉取自威海市小石岛海参养殖场；混合维生素无机盐为21金维他多维元素片粉末。

1.2 试验设计

试验前对刺参进行驯化1周，饲料为市售饲料与市售海泥粉以7∶3混合，使其适应饲养环境，观察没有异样后进行试验。试验开始前所有刺参饥饿处理24 h，挑选健康刺参称重，此体重为初始体重。试验分为4个组，Ⅰ～Ⅲ组为中药添加剂组，Ⅳ组为空白对照，每组2个平行。按照体重大小把刺参均匀投放到各养殖箱中，每箱10只。养殖期间每天上下午各吸底清扫养殖箱1次，下午换水1/3，每4 d彻底清洗养殖箱并换水。每天下午换水后喂食1次，投喂饲料量为箱中刺参总体重的3%，Ⅰ～Ⅲ组分别投喂中药添加剂A～C配方，投喂量为饲料重量的0.3%并与饲料混合均匀，养殖时间为40 d，期间温度保持在11～14℃，盐度在31.6‰～31.9‰，溶解氧均高于6 mg/L。

1.3 指标测定

1.3.1 生长性能测定 试验结束后所有刺参饥饿处理24 h，在6层干纱布上静止30 s后进行称重并记录。选取每个箱中生长状况良好的6只刺参计入数据，排除刺参吐肠及死亡对试验结果的影响。参照文献[6]的方法计算残食量、特定生长率(SGR)、增重率(WGR)和饵料系数。

1.3.2 免疫性能测定 刺参静置30 min后从体壁切口处收集体腔液，并按照试验需求用体腔缓冲液稀释，低温保存[7]。分别用总超氧化歧化酶(T-SOD)测试盒A001-1、溶菌酶(LZM)检测试剂盒A050和过氧化氢酶(Catalase CAT)检测试剂盒A007-2(均购自南京建成生物工程研究所)测定超氧化歧化酶、溶菌酶和过氧化氢酶。

1.3.3 水质测定 每次进行完全换水前收集样本立即测量。用美国YSI公司型号YSI 556 MPS多参数水质测量仪测定水体盐度、pH和溶解氧，使用溶氧空气饱和度方法进行溶解氧标定。用硝基水杨酸法比色测定硝态氮，以KNO3溶液绘制标准曲线。采用纳氏试剂光度法测定氨氮，测量波长为425 nm。

1.4 数据统计分析

试验数据用软件Excel2003进行处理，用Spss 19.0进行相关性检验、单因素方差分析和LSD多重比较。

2 结果与分析

2.1 生长及免疫性能

从表中看出，刺参的特定生长率及增重率均以Ⅱ组最高，分别为1.04%/d和14.88%；Ⅲ组次之，分别为0.22%/d和6.88%；Ⅰ组最低，分别为-0.05%/d和-0.69%。Ⅱ组、Ⅲ组的特定生长率和增重率均显著高于空白对照(Ⅳ组)，Ⅰ组显著低于空白对照。Ⅱ组的复方中药添加剂对促进生长性能和提升饵料效率的效果尤为明显，其特定生长率、增重率分别为对照的8倍和18倍，饵料系数则降低52.8%。Ⅲ组的特定生长率、增重率分别为对照组的1.7倍和8.3倍，饵料系数则降低18.8%。

刺参饲喂复方中药添加剂的超氧化歧化酶、溶菌酶和过氧化氢酶活性均显著高于对照。超氧化歧化酶活性以Ⅲ组最高，达62.87 U/mL，显著高于Ⅰ组和Ⅱ组；Ⅰ组、Ⅱ组分别为60.31 U/mL和60.21 U/mL，组间差异不显著。溶菌酶活性以Ⅱ组最高，达220.78 U/mL，显著高于Ⅰ组和Ⅲ组；Ⅰ组、Ⅲ组分别为206.69 U/mL和212.24 U/mL，组间差异显著。过氧化氢酶活性以Ⅱ组最高，达818.38 U/mL，显著高于Ⅰ组和Ⅲ组；Ⅰ组、Ⅲ组分别为759.09 U/mL和663.92 U/mL，组间差异显著。

表 各组刺参的生长及免疫性能

注：同列不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

Note：Different lowercase letters in the same column indicated 5% significant level.

图示 各组刺参养殖水体氨氮及硝氮的含量

Fig. Contents of ammonia nitrogen and nitrate nitrogen in the aquatic water of each group

2.2 养殖水质

从图示看出，刺参饲喂复方中药添加剂的水体氨氮、硝氮含量均高于对照。表明，投放复方中药添加剂会明显提升水中的氨氮含量，Ⅰ组、Ⅱ组的氨氮含量均约为Ⅲ组的2倍和对照的4倍。Ⅰ组、Ⅲ组的硝氮含量均约为对照的2倍，Ⅱ组略高于对照。

3 结论与讨论

3.1 复方中药添加剂对刺参生长性能的影响

试验结果表明，3种复方中药添加剂对刺参的生长影响不尽相同，其中，复方中药添加剂A对刺身生长有负面影响，降低饵料系数，说明此添加剂对刺参的进食效率有一定负面影响。复方中药添加剂B、C对刺参生长性能有显著提升作用，其中以复方中药添加剂B的效果最佳，其刺参的特定生长率、增重率分别为1.04%/d和14.88%，是对照的8倍和18倍；饵料系数为2.68，比对照组低52.8%。究其原因可能与复方中药添加剂B中加入了大量的人参有关，因为人参中含有丰富的营养物质如人参皂甙、有机酸及酯类和多种重要的氨基酸，从而促进刺参的生长。

3.2 复方中药添加剂对刺参免疫性能的影响

超氧化物歧化酶(SOD)可使对机体造成伤害的游离基转化为过氧化氢和氧，防止自由基促使疾病发生和机体衰老。溶菌酶(LZM)能分解致病菌的黏多糖，破坏细胞壁，还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，使病毒失活，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。过氧化氢酶(CAT)用来催化代谢过程产生的废物过氧化氢，避免其对机体造成伤害。体液免疫是海参抵抗外来微生物入侵的主要防御体系[8]，所以选用以上3种免疫酶作为刺参的免疫指标。试验结果表明，3种复方中药添加剂均可提高超氧化歧化酶的活性，其中，复方中药添加剂A、B的酶活性相当，C略高于前两组。溶菌酶活性大小为B>C>A，均显著高于对照组。过氧化氢酶活性B>A>C，但均远远高于空白对照组。综合来看，复方中药添加剂B促进免疫效果提升的作用好于A和C。可能与复方中药添加剂B中加入大量的人参、黄芪有关，因为人参含有大量人参多糖，可以通过影响机体细胞免疫，提高动物自身免疫性能；人参皂甙对于细胞吞噬活性、超氧化物歧化酶活力、一氧化氮酶活力有着明显的提升作用[9]。黄芪中的黄芪多糖能促进抗体生成，也有提高免疫力的作用[10]，可以显著提升海参体内溶菌酶的基因表达量，增强海参自身的免疫能力[11]。

3.3 复方中药添加剂对刺参养殖水质的影响

试验结果表明，3种复方中药添加剂对刺参养殖水质均有一定的负面影响，水体中的氨氮、硝氮含量均高于空白对照组，但均明显低于海参所能承受的最大氨氮值。养殖期溶解氧含量保持在6 mg/L以上，水中氧气充足，硝态氮主要形式为完全氧化的硝酸氮盐，易使海洋生物致病的亚硝酸盐含量极低。

[1] 何 翠，黄国强.全国及主要刺参养殖省份刺参养殖状况分析[J].渔业信息与战略，2014，29(1):24-30.

[2] 梁利国，阎斌伦，张晓君，等.常用中草药对4中病原户均体外抗菌效果的研究[J].渔业科学进展，2010，31(2)：114-119.

[3] 江长优，赵江贺，王 唱，等.不同中药复方对锦鲤免疫功能的影响[J].资源开发与市场，2012，28(9):774-776.

[4] 张照红.复方中草药对罗非鱼、草鱼生长性能和非特异免疫功能的影响[D].福州:福建农林大学，2011.

[5] 文国樑，林黑着，李卓佳，等.饲料中添加复方中草药对凡纳滨对虾生长、消化酶和免疫相关酶火星的影响[J].南方水产科学，2012，8(2):58-63.

[6] 刘海洋，王 晋，陈立颖，等.陆生植物替代藻粉对幼年刺参生长和免疫的影响[J].资源开发与市场，2014，30(11):1287-1289.

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[8] 安红红，宫向红，徐英江，等.海参免疫机制及免疫增强剂对其影响的研究进展[J].中国渔业质量与标准，2013，3(4):91-95.

[9] 郭 珺，俞 军，陈永亮，等.人参茎叶提取物对刺参生长、免疫及抗病力的影响[J].水生生物学报，2015，39(6):1085-1092.

[10] 颜 赟，王建伟，秦永彪，等.中药免疫增强剂研究现状[J].养禽与禽病防治，2013(7):2-4.

[11] 孙永欣.黄芪多糖促进刺参免疫力和生长性能的研究[D].大连:大连理工大学，2008.

(责任编辑： 冯 卫)

Effects of Three Kinds of Compound Traditional Chinese Medicine Feed Additives on Growth and Immunity Performance ofStichopusjaponicus

SHEN Zhen, WANG Xiaolan, HAN Yameng, GUAN Hongbin*

(MarineCollege,ShandongUniversity，Weihai,Shandong264209,China)

To provide references for applying traditional Chinese medicine feed additives in culture ofS.japonicus, three different kinds of Chinese traditional medicine(A: sealwort 3 g, lucid ganoderma 3 g, Salvia miltiorrhiza 3 g, motherwort 2 g, hawthorn 1 g and liquorice 1 g; B: ginseng 9 g, Astragalus membranaceus 6 g, herba epimedii 6 g, Eucommia ulmoides 6 g, medlar 6 g, honeysuckle 6 g, purslane 6 g, mushroom 10 g, liquorice 3 g; C: lucid ganoderma 15 g, radix polygonati officinalis 15 g, isatis root 10 g, dandelion 10 g, illicium verum 10 g, liquorice 5 g) were used as feed additive to find out the effects onS.japonicusgrowth and immunity(test period 40 d). Results: B and C could significantly enhance the growth performance ofS.japonicus.Especially B, the specific growth rate(1.04%/d) and weight gain rate(14.88%) of which were respectively eight times and 18 times that of the control(P<0.05). The food coefficient decreased; A, B and C could all significantly enhance the immunity performance ofS.japonicus(P<0.05). B had the prominent performance, SOD, LZM and CAT of which were respectively 60.21 U/mL, 220.78 U/mL and 818.38 U/mL. All the three kinds of feed additives had negative effects on water quality, contents of ammonia nitrogen and nitrate nitrogen in the water were all higher than the control, while obviously lower than the maximum nitrate nitrogen valueS.japonicuscould endure.

sea cucumber;Stichopusjaponicas; Chinese traditional medicine additive; growth performance；immune performance; water quality

2016-01-27； 2016-03-07修回

威海市海洋研究院资助项目“刺参亲参性腺良好发育相关技术研究”(1070413421205)

沈 朕(1990-)，男，在读硕士，研究方向：基因工程。E-mail：570501747@qq.com

*通讯作者：关洪斌(1961-)，男，副教授，博士，从事逆境生理、基因表达与动物营养研究。E-mail：guanhongbin@sdu.edu.cn

1001-3601(2016)04-0170-0103-03

S968.9

A