苏 楠，马丽卿，马永成，岳晓禹

（1.河南牧业经济学院食品工程学院，河南郑州 450011；2.郑州大学人民医院临床药理室，河南 郑州 450003）

棒曲霉素对人肝细胞L-02的毒性效应及作用机制

苏 楠1，马丽卿1，马永成2，岳晓禹1

（1.河南牧业经济学院食品工程学院，河南郑州 450011；2.郑州大学人民医院临床药理室，河南 郑州 450003）

目的研究棒曲霉素（PAT）对人肝细胞L-02的毒性作用，并探讨其作用的分子机制。方法PAT 1.25，2.5，5，10和20 μmol·L-1分别作用于L-02细胞24和48 h，采用噻唑蓝（MTT）法检测PAT对L-02细胞增殖的抑制作用；PAT 0，5和10 μmol·L-1作用L-02细胞24 h后，Hoechst33258和JC-1染色，通过荧光显微镜进行细胞形态及线粒体膜电位（MMP）观察；利用流式细胞术对细胞凋亡、MMP及细胞内活性氧（ROS）水平进行定量分析；Western蛋白印迹法检测PAT对线粒体凋亡通路的影响。结果PAT明显抑制L-02细胞的生长，24和48 h的IC50值分别为6.61和2.78 μmol·L-1；与正常对照组低MMP比率（9.2±2.3）%相比，PAT 5和10 μmol·L-1组低MMP比率显著升高（P<0.01），分别升高至（23.4±4.5）%和（47.1±5.5）%；PAT 5和10 μmol·L-1处理后L-02细胞早期凋亡率较正常对照组（3.8±1.1）%升高（P<0.01），分别增至（29.8±4.5）%和（24.1±6.2）%；PAT引起L-02细胞内ROS增加，使用外源性谷胱甘肽预孵育细胞后，阻断了PAT诱导的ROS升高和增殖抑制的作用。结论PAT可显著影响L-02的生长，并通过线粒体途径诱导细胞凋亡，其机制与胞内ROS水平升高有关。

棒曲霉素；细胞毒性；细胞凋亡；线粒体；活性氧

棒曲霉素（patulin，PAT）属于曲霉和青霉等真菌的次级代谢产物，普遍存在于发霉的水果、蔬菜、谷物和动物饲料中，尤其在腐烂的苹果及苹果汁、苹果酒等苹果制品中，PAT的含量最高。PAT的主要接触途径是消化道，经消化道吸收进入血液循环，分布于全身各个组织器官，在细胞色素P450酶作用下其毒性有所下降，但代谢产物仍具有毒性［1-2］。体外实验表明，PAT可诱导多种菌株的基因突变、对体外培养的细胞亦有DNA损伤作用；动物实验研究也发现，PAT对胃肠、肝肾及免疫系统具有明显毒性。因此，WHO和欧盟已将果汁中的PAT检测限量定为50 μg·L-1，目前FDA以及世界多个国家也对食品中PAT含量做了严格限定［3］。……