刘素娜，姚 武，暴 磊，李 娟，张红义，侯建勇，王 迪，陈慧婷，郝长付

（郑州大学公共卫生学院，河南 郑州 450001）

采用ChIP-chip技术分析大鼠肺成纤维细胞转分化前后全基因组蛋白H3K4三甲基化水平的改变

刘素娜，姚 武，暴 磊，李 娟，张红义，侯建勇，王 迪，陈慧婷，郝长付

（郑州大学公共卫生学院，河南 郑州 450001）

目的研究经二氧化硅（SiO2）染毒的肺成纤维细胞（LF）转分化前后全基因组蛋白H3赖氨酸4（H3K4）三甲基化（met3）水平的改变。方法原代培养大鼠肺泡巨噬细胞（AM）和LF，采用transwell共培养，建立共培养模型，用100 mg·L-1游离SiO2粉尘染毒AM 24 h，收集LF细胞，免疫组织化学法对转分化后的LF进行表型鉴定。采用染色质免疫共沉淀联合芯片技术（ChIP-chip）对LF全基因组蛋白H3K4met3进行高通量筛选，采用染色质免疫共沉淀-实时荧光定量聚合酶联反应技术（ChIP-qPCR）验证芯片结果，采用定量逆转录聚合酶联反应技术（qRT-PCR）检测H3K4出现显著差异的mRNA表达水平。结果通过对经SiO2染毒前后LF全基因组蛋白H3K4met3水平的对比，共筛选出1815个基因存在H3K4显著性差异（Cy3/ Cy5比值>2.0或<0.5，NimbleScan V2.5软件），其中518个基因出现H3K4met3程度增高，1297个基因H3K4met3程度降低。随机挑选2个差异表达基因nfib和kpna3，以ChIP-qPCR和qRT-PCR方法验证，取得与CpG岛芯片一致的结果。结论经SiO2染毒的LF转分化前后全基因组蛋白H3K4met3水平存在显著改变。ChIP-chip技术有利于进一步揭示矽肺纤维化发生的分子机制，有助于发现新的蛋白标志物和基因干预靶点。

成纤维细胞；二氧化硅；肺泡巨噬细胞；染色质免疫共沉淀；组蛋白H3赖氨酸4；甲基化

目前，尘肺病仍是中国最严重的职业病，而矽肺是尘肺病中危害最严重的一种。长期吸入游离二氧化硅（SiO2）粉尘，导致肺成纤维细胞（lung fi⁃broblast，LF）转分化为肌成纤维细胞（myofibro⁃blast，MF）是矽肺发病重要的细胞基础［1］。细胞转分化是指分化完全的细胞在某些因素的刺激下，丢失其原有的表型特点而转变为其他类型细胞，是一种特定的生理或病理过程［2］。

LF在正常静息状态下不具有过度增殖和分泌能力，发生活化、功能改变是细胞转分化的结果［3］。M……