★　李晓芳　刘翔　李立芳　邓红　张建康　叶凤玉　欧阳辉　叶喜德*　(.江西中医药大学附属医院　南昌0006；.江西湘雅萍矿合作医院　江西 萍乡 700；.江西抚州医科研究所　江西 抚州 000；.江西中医药高等专科学校　江西 抚州 000；.江西中医药大学　南昌 000)

*基金项目：江西省卫生厅中医药科研计划项目(2012A140)。

**第一作者：李晓芳，女，研究方向：中药化学成分。



UHPLC/Q-TOF-MS/MS快速鉴定瓜馥木化学成分研究*

★李晓芳1**刘翔2李立芳3邓红1张建康4叶凤玉5欧阳辉5叶喜德5***(1.江西中医药大学附属医院南昌330006；2.江西湘雅萍矿合作医院江西 萍乡 337003；3.江西抚州医科研究所江西 抚州 344000；4.江西中医药高等专科学校江西 抚州 344000；5.江西中医药大学南昌 330004)

*基金项目：江西省卫生厅中医药科研计划项目(2012A140)。

**第一作者：李晓芳，女，研究方向：中药化学成分。

摘要：目的：利用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UHPLC/Q-TOF-MS/MS)联用技术，对瓜馥木根和藤茎的化学成分进行分析。方法：采用Welch C18色谱柱(100 mm×2.1 mm，1.7μm)，以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱进行色谱分离；质谱采用电喷雾(ESI)离子源，在正离子模式下采集数据，运行时间40 min，使用质谱分析软件中的目标化合物筛查法，通过保留时间、精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片鉴定化学成分。结果：初步鉴定了44个化学成分。结论：该方法快速、简单，可作为瓜馥木化学成分的一种快速鉴定方法。

关键词：瓜馥木；超高效液相色谱-飞行时间质谱；化学成分

瓜馥木(Fissistigmaoldhamii(Hemsl.)Merr.)，又名钻山风，为番荔枝科瓜馥木属植物，多生于低海拔山谷旁、溪旁、潮湿的疏林中。该属植物在全球约75种，我国就占有23种[1]，主要分布在福建、台湾、浙江、江西、湖南、广东、广西、海南及云南等省市。瓜馥木多用根和藤茎入药，味辛性温，具祛风除湿、活血化瘀、镇痛消肿等功效,主治风湿痹痛，腰痛，胃痛及跌打损伤。该植物中主要成分为次生代谢产物，即包括以阿朴菲类为主的生物碱，该生物碱具有抗炎、镇痛的作用[2]，是自然界中分布较为广泛且具有重要生物活性[3]。此外，瓜馥木中还含有黄酮类、有机酸等化学成分。现有的文献对瓜馥木化学成分研究不多，这不利于我们深入研究瓜馥木的物质基础，笔者利用超高效液相色谱与飞行时间质谱联用(UHPLC/Q-TOF-MS/MS)[4-5]技术，对瓜馥木进行了化学成分研究，希望为其进一步开发提供参考。

1仪器与材料

超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(AB SCIEX Triple TOF 5600+；Foster City，CA)；岛津超高效液相色谱仪(Nexera LC-30A，日本)，含在线真空脱气机，高压二元梯度泵，自动进样器，柱温箱；Welch C18色谱柱(100 mm×2.1 mm，1.7μm)；KQ-500DE 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；Sartorious BT25S型十万分之一电子分析天平(赛多利斯公司，德国)。

甲酸(色谱纯，美国TEDIA公司)；甲醇、乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)；水为Milli-Q系统纯化水(美国Millipore公司)，其余试剂为分析纯。

瓜馥木根茎购买于江西省樟树药材市场，经江西中医药大学黄小方老师鉴定为瓜馥木(Fissistigmaoldhamii(Hemsl.)Merr.)的根茎。

2实验方法

2.1质谱条件离子源为电喷雾离子化源(ESI)，正离子模式；质量扫描范围m/z 100～1 250；喷雾电压：5500 V，雾化气温度：550℃，气帘气：172.36 kPa，雾化气和辅助气：344.74 kPa；去簇电压(DP)：100 V；采用TOF-MS-IDA-MS/MS方法采集数据，TOF/MS一级预扫描和触发的二级扫描TOF/MS/MS离子累积时间分别为200、100 ms，CE碰撞能量为-65eV，CES碰撞能量叠加为(65±15)eV，触发二级的方法为IDA，多重质量亏损(MMDF)和动态背景扣除(DBS)为触发二级的条件，满足该条件的优先进行二级扫描。

表1　瓜馥木根茎提取物的化学成分鉴定结果

2.2液相条件流动相：0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)，以梯度洗脱，0.1～2 min，1% B；2～5 min，1%～20%B；5～25 min，20%～40% B；25～33 min，40%～90% B；33～37 min，90% B；37.1～40.25 min，10%B。采用Welch C18色谱柱(100 mm×2.1 mm，1.7μm)，体积流量0.25 mL/min，柱温箱控温45 ℃，进样量2 μL。

2.3样品制备及检测取瓜馥木根茎50 g，精密称定，置于回流烧瓶中，加至石油醚500 mL，浸泡12 h，超声振荡0.5 h，于40℃的水浴锅中回流提取3 h，共三次，合并提取液，浓缩，得浅黄色浸膏0.262 g。精确称取浸膏0.200 g，置于刻度试管10 mL中，加入2 mL石油醚：苯为1∶1(v/v)的溶液当中，充分振荡，使其完全溶解，然后加至0.1%甲酸水溶液-乙腈1.5 mL，剧烈振荡2 min，置于40℃水浴锅中静置0.5 h，将试管取出冷却到室温，加入重蒸馏水至刻度，分层后，取上清液，采用UHPLC/Q-TOF-MS/MS联用技术对样品进行分析检测。

3结果与分析

前期通过Scifinder数据库，建立瓜馥木属植物化合物数据库，并在该数据库进行检索瓜馥木中潜在的化学成分。采用Analyst TF1.6和Peakview(Version1.2，AB SCIEX)软件对瓜馥木提取物的质谱数据进行处理。依据测定相对分子质量与理论精确相对分子质量的偏差小于5×10-6的原则，确定各色谱峰对应化确定各色谱峰对应化合物的分子式，在已建立的瓜馥木植物化学成分数据库中检索并匹配化合物。

3.1瓜馥木化学成分的MS/MS分析在瓜馥木根茎提取物中共鉴定出了色谱峰44个，实验结果见表1。然后对同分异构体进行鉴别，通过二级质谱获得化合物的碎片信息，推测出离子裂解状况，结合数据库中各个化合物结构，区分同分异构体。

4讨论

本文在化合物精确相对分子质量的基础上，利用UHPLC/Q-TOF-MS/MS联用技术，对瓜馥木化学成分进行了分析，并鉴定出色谱峰44个化合物，该法为研究瓜馥木化学成分提供了相对准确、高效的分析途径，也能为瓜馥木进一步化学成分分离提供数据参考。实验结果表明，该方法可快速完成药材成分分析工作，省去常规方法中由粗提物、分离、纯化，到重结晶后方可鉴定化合物的繁琐过程，节约了研究成本，并且实现了药材中多组分的良好分离，为瓜馥木药效物质基础研究提供了数据支撑。但该法也存在一定的局限性，如不能提供出化合物几何构型，且不能准确指出空间位置，如果利用该方法为导向，针对性地对首次发现或者潜在新化合物进行定向分离得到单体，进一步配合四大光谱进行结构确证，将为传统的中药化学成分分离技术提供新的思路。

参考文献

[1]中国科学院中国植物志编委会.中国植物志[M].北京:科学出版社.1979，30(2):10.

[2]陈奇，毕明，王明华，等．钻山风的药理研究[J].中草药，1983，14(10)：23-25.

[3]傅春燕，尹文清，周中流.瓜馥木中阿朴菲类生物碱的研究[J].中药材，2007，30(4)：409-412.

[4]Zhu J B, Guo X J, Fu S P, et al. Characterization of steroidal saponins in crude extracts from Dioscorea zingiberensis C. H. Wright by ultra-performance liquid chromatography/electrospray ionization quadrupoletime-of-flight tandem mass spectrometry[J].Pharm Biomed Anal,2010,53(3):462-474.

[5]Qi L W, Wan H Y, Zhang H, et al. Diagnostic ion filtering to characterize ginseng saponins by rapid liquid chromatography with time-of-flight mass spectrometry[J].J Chromatogr A,2012,1230(23):93-99.

收稿日期：(2015-06-17)编辑：曾文雪

中图分类号：R284.1

文献标识码：A

通信作者：***叶喜德，男，研究方向：中草药活性成分。