庄嘉琅，曾　行，钟国平，金　晶，苟晓丽，毕惠嫦，黄　民

(中山大学药学院药物代谢与药动学实验室，广东 广州　510006)

基于报告基因检测的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型的建立

庄嘉琅，曾行，钟国平，金晶，苟晓丽，毕惠嫦，黄民

(中山大学药学院药物代谢与药动学实验室，广东 广州510006)

黄民(1963-)，男，博士，教授，博士生导师，研究方向: 临床药理学与药物基因组学，E-mail: huangmin@mail.sysu.edu.cn

摘要：目的 建立基于报告基因法的高通量筛选细胞模型，用来发现PXR、FXR和LXRα受体激动剂。方法利用Real-time定量PCR方法比较HEK293、HepG2和LS174T细胞中内源性核受体PXR、FXR和LXRα的表达量，将pSG5-hPXR和pGL3-XREM-CYP3A4、pEGFP-N3-hFXR和EcRE-TK-Luc、 pCMX-FLAG-hLXRα和pGL3-XREM-CYP3A4等质粒分别共转染到工具细胞中，优化共转染比例，并考察阳性药与萤光素酶报告基因表达强度的量效关系、模型特异性和稳定性。结果① 根据Real-time定量PCR结果，模型选用低表达PXR、FXR和LXRα的HEK293细胞作为工具细胞；② 根据不同共转染比例对报告基因活性的结果，PXR、FXR和LXRα报告基因药物筛选模型的报告基因和过表达质粒比例，最终分别选择1 ∶1、2 ∶1和2 ∶1；③ 模型中，报告基因活性均与相应阳性药物(PXR/Rif、FXR/CDCA和LXRα/T0901317)呈剂量依赖性增长；④ 仅PXR激动剂Rif、FXR激动剂CDCA和LXRα激动剂T0901317可分别明显增加相应筛选模型的报告基因活性，分别重复5次试验后，计算得Z′值分别为0.58、0.66和0.63。结论该研究建立的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型，具有良好的特异性和稳定性，适用于对PXR、FXR和LXRα受体激动剂的筛选，进而开发以核受体作为药物靶点的药物。

关键词：核受体；报告基因；高通量筛选；PXR；FXR；LXRα

核受体(nuclear receptors，NRs)为脂溶性配体依赖转录因子，现已明确核受体可根据配体分子的浓度调节靶基因的转录过程，在个体发育中参与多种生理功能的调节，如形态发育、细胞增殖分化、机体稳态维持、高级神经功能控制以及决定细胞命运等重要生命现象中发挥作用[1]。……