谷 超，王海涛，周晓冬，侯 敏，李 光(天津医科大学基础医学院生物学教研室，天津 00070;天津市泌尿外科研究所肿瘤免疫室;天津市胸科医院检验科;通讯作者，E-mail:ydsweyou@6．com;共同通讯作者，E-mail:ydswlg@6．com)

尿路感染(urinary tract infections，UTIs)是人类感染性疾病的多发病。大肠杆菌是UTIs的主要致病菌，在引起下位尿路的尿道炎、膀胱炎后可上行性感染导致肾盂肾炎。其中引起肾盂肾炎的大肠杆菌80%以上具有P菌毛，称为尿道致病性大肠杆菌或致肾盂肾炎大肠杆菌(Uropathogenic E．coli，UPEC)［1，2］。UPEC的pap黏附基因簇编码的P菌毛介导与上皮细胞的黏附是形成感染的先决条件。同时UPEC菌株还含有编码其他与其致病性密切相关毒力因子的基因。研究尿路感染性细菌与宿主尿路上皮细胞相互作用需要建立敏感细胞感染模型。有关UPEC对尿路细胞黏附的报道较少，本研究在前期实验［3，4］的基础上进行了UPEC菌株感染人尿路移行上皮癌细胞的相关研究，为深入探讨尿路感染的致病机制奠定基础。

1 材料和方法

1．1 菌株

UPEC132，源自天津医科大学总医院的肾盂肾炎患者尿标本分离菌株，其基因型为papA F13+papGⅡ型［5］;UPECJ96 为 papA F13 型的代表株［5］;E．coli K-12p678-54为无菌毛代表株，均为Hull教授惠赠，上述菌株培养采用LB培养基。

1．2 UPEC毒力基因papC，hly和cnf1的PCR检测

以受试菌株染色体DNA为模板，采用PCR方法检测papC，复合PCR检测hly和cnf1。用于扩增papC的上游引物5'－GAC GGC TGT ACT GCA GGG TGT GGCG－3'和下游引物5'－ATA TCC TTT CTG CAG GGA TGC AATA－3'，扩增hly的上游引物5'－AAC AAG GAT AAG CAC TGT TCT GGCT－3'和下游引物5'－ACC ATA TAA GCG GTC ATT CCC GTCA－3'以及扩增cnf1的上游引物5'－AAG ATG GAG TTT CCT ATG CAG GAG－3'和下游引物5'－CAT TCA GAG TCC TGC CCT CAT TATT－3'，均由大连TaKaRa公司合成。反应体系(25 μl)为:10 × buffer缓冲液2．5 μl，dNTP 0．2 mmol/L，上下游引物各 0．4 μmol/L，模板 DNA 1 μl，TaqDNA 聚合酶(TaKaRa 公司)0．25 μl。反应条件为:95 ℃ 预变性5 min;95 ℃ 1 min，60 ℃ 30 s，72 ℃ 3 min，30个循环;最后72℃延伸7 min。……