刘敏龙，张小玲，王国恩，骆艳妮，强 雷，张 军(西安交通大学第二附属医院重症医学科，西安70004;西安交通大学第二附属医院病理科;西安交通大学第二附属医院消化内科;通讯作者，E-mail:junz@6．com)

脓毒症(sepsis)引起的失控炎症反应是导致机体多器官功能障碍的原因之一，而多器官功能障碍综合征是导致早期脓毒症患者死亡的主要原因［1，2］。程序性细胞死亡受体－ 1(programmed cell death receptor-1，PD-1)及其程序性细胞死亡配体(PD-L1)属于CD28/B7家族。目前研究认为该途径主要发挥负性免疫调节作用，二者结合诱导免疫耐受和免疫功能抑制［1，3］。最近 Jaworska 等［4］研究指出缺血再灌注小鼠的肾脏肾小管上皮细胞高表达PD-L1，PD-L1高表达参与肾脏保护。PD-L1可在免疫细胞、上皮细胞、心脏和肾脏等多器官组织广泛表达［3］。据此提出假设脓毒症发生过程中多脏器组织可能存在PD-L1表达变化。查阅文献，关于脓毒症时脾脏、心脏和肾脏PD-L1表达变化报道较少。本研究通过盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture，CLP)建立小鼠脓毒症模型，观察脓毒症脾脏、肾脏和心脏PD-L1表达。

1 材料与方法

1．1 主要试剂和仪器

免疫荧光抗体 PE-anti-mouse-CD115、APC-antimouse-PD-L1及同型对照抗体、Fc阻滞剂及红细胞裂解液均购自美国Biolegend公司。小鼠脂多糖ELISA试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司。一抗兔的单克隆Anti-PD-L1抗体购自美国Abcam公司，二抗兔Streptavidin-HRP试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司。流式细胞仪型号BD FACSAriaⅡ。酶标仪型号 Thermo公司 DENLEY DRAGON Wellscan MK3。

1．2 实验动物和分组

10－13周龄雄性C57BL/6小鼠40只，体重20－25 g，由西安交通大学医学院动物实验中心提供。随机分为假手术组和脓毒症模型组，各组按时间分为24 h和48 h，每组10只。……