张 羽

（辽宁省辽阳市中心医院病理科，辽宁 辽阳 111000）

癌胚抗原、层粘连蛋白阳性表达在胃镜活检胃癌诊断中的研究应用

张 羽

（辽宁省辽阳市中心医院病理科，辽宁 辽阳 111000）

目的研究分析癌胚抗原（CEA）、层粘连蛋白（LN）在纤维胃镜活检黏膜组织中的表达，探讨在胃癌发生、发展、治疗中的作用与临床意义。方法应用免疫组织化学技术与常规病理技术相结合，对胃镜活检组织内CEA、LN进行检测。结果CEA、LN在胃癌组织中的表达率分别为97.5%、50%。与其对照组比较P=0.001、P=0.0039。结论检测CEA、LN可鉴别重度非典型增生与癌，达到尽早期确诊胃癌的目的；LN的表达可协助判断胃癌的浸润、转移、预测预后，为临床治疗提供重要的参考依据。

胃肿瘤；CEA；LN；免疫组织化学技术；病理诊断

在消化道恶性肿瘤中胃癌是最常见之一。近年来，随着内镜的广泛使用与相应技术的日臻完善，应用纤维胃镜进行活检组织检查、同时采用HE染色与免疫组织化学S-P法相结合，即可早期确诊胃癌、合理选择化疗、免疫治疗、基因治疗，最大限度提高确诊率、改善治疗效果。笔者对胃镜活检胃癌组织中CEA、LN进行了检测，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料：选取2012年1月至2013年12月纤维胃镜标本观察组80例，男60例，女20例，最大年龄85岁，最小年龄35岁，平均年龄57.3岁。全部病例均经纤维胃镜活检病理组织学检查确诊为胃癌。其中高分化腺癌20例、中分化腺癌28例、低分化腺癌18例、乳头状腺癌6例、黏液腺癌6例、印戒细胞癌2例。80例经手术后病理检查证实术前诊断，诊断依据（符合）全国2005年诊断标准。设阴性对照（重度非典型增生为对照组：40例），每次设替代（空白）对照与阳性对照。

1.2 实验方法：①常规石蜡切片、HE染色；②免疫组织化学超敏S-P法。

1.3 主要试剂：福州迈新生物技术开发公司售S-P试剂盒与相应第一抗体。①石蜡切片常规脱蜡增水、PBS洗3×3′。②抗原修复：胰酶、高压加热、微波处理，PBS3×3′。③S-P试剂盒中的“A”室温10 min，封闭阻断内源性过氧化物酶活性，PBS洗3×3′。④S-P试剂盒中的“B”室温10 min（非免疫性动物血清）。⑤第一抗体，温盒内4 ℃过夜，PBS洗3×3′。⑥第二抗体，S-P试剂盒中的“C”室温下温盒孵育10 min，PBS洗3×3′。⑦第三抗体，S-P试剂盒中的“D”室温下10 min，PBS洗3×3′。⑧滴DAB新配液2滴，显微镜下观察3～8 min，自来水洗。⑨苏木素复染。⑩各级乙醇脱水、干燥、透明，中性树胶封固。

1.4 S-P法中阳性表达的判定：①DAB分布在肿瘤实质的比例，无（-）、1/10～l/4（+）、1/4～1/2（++）、l/2～3/4（+++）。②阳性细胞数：无（-）、5%～25%（+）、25%～50%（++）、50%～70%（+++）。③DAB显色强度：基本无（-）、淡黄色或者较强但少（+）、强、较多呈黄色（++）、强而且多呈棕黄色（+++）。依以上标准综合判定。

2 结 果

观察组80例，CEA阳性表达于胞质，其总阳性率为97.5%，3级25%、2级37.5%，3、2级之和62.5%呈强阳性。与对照组相比，有显著性差异。

80例中，LN阳性表达于腺体基底膜处，呈断线状、索条状、甚至碎片状，50%缺如，表明在胃癌组织中基底膜结构明显遭到降解破坏，基底膜结构的是否完整与存在，揭示胃癌的恶性度、转移与浸润程度。同时观察到CEA高阳性表达者，其LN表达下降较明显，提示CEA与LN表达基本呈负相关。见表1。

表1 两组患者实验结果分析

3 讨 论

胃癌乃最常见消化道恶性肿瘤之一，甚至其发病率居全部恶性肿瘤之首。近年来，随着内镜的广泛使用与相应技术的日臻完善，人们采用纤维胃镜对活检组织行病理学观察，部分胃癌可得到确诊。但在另一部分活检标本中对于癌与非典型增生单凭石腊切片HE染色难于判断。重度非典型增生细胞的形态与癌细胞相似，在单一的活检标本上，重度不典型增生与癌很难鉴别，甚至不能鉴别，但对它的准确诊断直接关系到临床的合理治疗。为此，笔者对纤维胃镜活检标本同一组织块进行常规病理学观察的同时，运用免疫组化S-P法联合检测胃癌组织中CEA、LN，探讨从胃镜取材组织中尽可能早期确诊胃癌，并对胃癌患者的预后判断及临床治疗提供有效可靠的依据。

CEA为相对分子质量200 kD的糖蛋白，由胎儿能分泌多糖一蛋白质复合物的腺管上皮细胞合成。偶见于正常成人细胞及良性上皮性肿瘤组织。而在许多癌组织，尤其胃肠道癌、胰腺癌中则大量表达。由于该抗原可由肿瘤细胞分泌于血液之中，因此可作为肿瘤治疗与微转移以及复发的检测物[1-3]。梁廷波等曾采用免疫组化ABC法检测了41例胃癌及其不同距离癌旁黏膜中CEA的表达，结果胃癌组织内CEA 100%表达阳性，癌旁2、5 cm处分别为40%、26%[4-5]。本组观察结果：与国内相关文献报道相符合，观察组计80例，CEA在胃癌组织阳性表达78例（97.5%），其中仅2例阴性、阴性表达为++30例、+++20例，强阳性表达计50例（62.5%）。而在对照组重度非典型性增生40例中，CEA阳性表达仅8例，且表达强度均为（+）。通过实验又一次证明了CEA在胃癌组织中的定位表达，不仅敏感度高，而且特异性较强，是胃癌细胞的良好标志物。

肿瘤转移是一个复杂的多步骤过程，可分为4个阶段：①肿瘤从原发灶脱离；②降解基底膜、向外浸润、迁移并黏附于血管内皮细胞；③进入循环系统，随着血液到达并停留于远处血管壁；④穿过血管，侵入细胞外基质。最后在特定的组织器官内形成转移灶。显然，胃癌组织中基底膜构成则至关重要。层粘连蛋白（LN）是细胞外基底膜的主要组成部分，分布于基底膜和细胞外基质，通过与其受体（LN-R）结合调节细胞的黏附、扩散、转移与增殖。张林等采用S-P法检测51例胃癌中LN表达，其阳性率为41.2%[6-7]。在我们的实验中，胃癌观察组80例、40例（50%）阴性，阳性表达+～++）为40例，定位表达不是缺如就是表达强度低，32例（+），基本为碎片状分布，在重度非典型性增生对照组，阴性只有6例34例（85%）阳性表达，且其中24例（60%）强阳性（++～+++）表达。同时，它们的阳性颗粒多定位于基底膜处，呈围管状连续线样排列。两组之间表达明显差别与分布形式的迥异，证明胃癌组织中LN的阳性表达较重度非典型性增生远远为低，即胃癌中LN阳性表达少或缺如，意味着基底膜被降解破坏，肿瘤易于浸润、扩散转移。同时还发现，低分化腺癌病例活检组织内LN阳性表达远远低于高分化腺癌；低分化腺癌组织中LN的阳性表达多呈颗粒、碎片状，而高分化腺癌内则多为断续线状，偶见连续线状分布。胃癌组织中LN阳性表达量的差异与分布形式的不同，提示胃癌细胞的分化程度与其浸润转移的能力也呈负相关[8-10]。观察组LN表达阴性的40例，均应在配合手术治疗、化疗的同时，选择使用抗肿瘤转移新药：包括抗癌细胞黏附、抗基底膜降解等。

综上所述，对纤维胃镜活检胃黏膜组织，即同一病例、同一部位，同时常规石蜡切片免疫组织化学、HE染色两种方法检测CEA、LN的表达，首先可以通过这一最简便易行的分子生物学方法，鉴别重度非典型增生与癌，尽早确诊胃癌；其次，通过检测LN除进一步证实胃癌的诊断，还可预测肿瘤细胞被黏附，基底膜被降解的程度，了解肿瘤发生浸润、转移的可能性；特别重要的是，观察LN在胃癌组织的表达，可指导在手术治疗的基础上，辅以：①常规化疗药物治疗；②免疫治疗；③配合使用抗肿瘤转移新药；例如阻止肿瘤血管形成、抗黏附、抗基底膜被降解药等，借以提高综合治疗效果、降低复发转移率、提高生存率，改善胃癌患者的生活质量。

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