姚茂忠，陈湛娟

（1.海南医学院 海南省药物安全性评价研究中心，海南 海口 571199；2.海南医学院 药学院，海南 海口 571199）

脂联素对高糖培养大鼠肾小管上皮细胞炎症因子的影响

姚茂忠1，陈湛娟2*

（1.海南医学院 海南省药物安全性评价研究中心，海南 海口 571199；2.海南医学院 药学院，海南 海口 571199）

研究脂联素对高糖培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）炎症因子的影响.高糖培养NRK-52E细胞分为对照组和试验组（低、中和高剂量组）.试验各组培养液中加入脂联素，使其在培养液中的含量分别为5、10和20 mg/L.培养48h后测定各组细胞培养液上清炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的含量.结果表明，脂联素能够显著NRK-52E细胞培养液上清TNF-α、IL-6和IL-1β的含量，差异均达到显著水平（P<0.05或P<0.01）.结论：脂联素能够降低高糖培养大鼠肾小管上皮细胞炎症因子的含量.

脂联素；高糖；肾小管上皮细胞；炎症因子

脂联素（adiponectin，APN）是由脂肪细胞分泌的细胞因子，又名脂肪细胞补体相关蛋白.其由Scherer等在1995年从鼠脂肪细胞中发现的一种新的蛋白类[1]，具有抗动脉粥样硬化、抗糖尿病和增加骨骼肌葡萄糖摄取的作用[2].已有研究发现脂联素受体在心、肝和肾等多种组织中表达[3]，表明脂联素可能对多种疾病包括肾脏炎症有调控作用，故研究脂联素与肾脏炎症细胞因子之间的关系，具有重要意义.

1 材料与方法

1.1 实验材料

NRK-52E细胞（上海细胞库）；DMEM和胎牛血清（美国Hyclone）；大鼠脂联素（美国Sigma）、大鼠TNF-α ELISA试剂盒（晶美生物）、大鼠IL-6 ELISA试剂盒（美国Santa Cruz）、大鼠IL-1β ELISA试剂盒（美国Santa Cruz）.

1.2 实验仪器

CO2培养箱（日本三洋）、酶标仪（Thermo MK3）.

1.3 细胞培养

将NRK-52E细胞复苏后置于含10%胎牛血清的DMEM中，置于CO2培养箱中培养（37℃、5% CO2）.细胞融合至80%以上，倾去瓶中培养液，以0.05%胰酶和0.02%EDTA消化，1000 r/min离心5min后去上清.调整培养液中葡萄糖浓度为30 mmol/L.各试验组培养液中加入脂联素，使其在培养液中的浓度分别为5 mg/L、10 mg/L和20 mg/L.NRK-52E细胞接种到相应培养液中培养，并调整细胞浓度为5×104个/mL.培养48 h后收集细胞培养液上清，进行各项指标的检测.

1.3 检测指标及方法

采用ELISA试剂盒说明书测定培养液上清中TNF-α、IL-6和IL-1β的含量，所用仪器为酶标仪.

1.4 统计分析

采用SPSS16.0 One-way ANOVA程序进行单因素方差分析，结果用均值±标准偏差表示.P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著.

2 结果

脂联素对细胞培养液上清炎症因子的影响结果见表1.与对照组相比，各剂量组TNF-α含量分别下降5.7%（P>0.05）、29.4%（P<0.05）和32.6%（P<0.01），表明脂联素降低TNF-α含量的趋势明显；与对照组相比，各剂量组IL-6含量分别下降20.7%（P<0.05）、19.0%（P<0.05）和29.3%（P<0.05），表明脂联素能显著降低IL-6的含量；与对照组相比，各剂量组IL-1β含量分别下降6.2%（P>0.05）、7.7%（P>0.05）和12.4%（P<0.05），表明脂联素具备降低IL-1β含量的能力.

表1 脂联素对培养液上清中炎症因子含量的影响Tab.1Effect of APN on content of TNF-α、IL-6 and IL-1β in supernatant

3 讨论

炎症因子是指参与炎症反应的各种细胞因子，其浓度升高表明细胞正受炎症侵袭.已有研究表明高糖培养基可诱导NRK-52E细胞炎症因子的表达和释放[4].但脂联素对于高糖培养肾小管上皮细胞炎症因子的影响，目前尚未见报道.本研究结果表明脂联素能降低高糖培养大鼠肾小管上皮细胞培养液上清炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的含量，表明脂联素可降低高糖所致的大鼠肾小管上皮细胞炎症反应.有文献认为脂联素可预防肾病的发生[5-6]，并可通过TGF-β1信号通路保护肾脏[7].而根据本结果，我们认为脂联素可能通过降低炎症反应而起到保护肾脏的作用，但其机制尚需进一步研究.

[1]Scherer P E,Williams S,Fogliano M,et a1.A novel sernmprotein similar to Clq,produced exclusively in adipo⁃cytes[J].J Biol Chem,1995,270:26746-26749.

[2]刘平,王砚青,卞茸文,等.原发性高血压患者血清脂联素水平的研究[J].实用医学杂志,2006,22(17):1982-1983.

[3]Yamauchi T,Kamon J,Ito Y.Cloning of adiponectin recep⁃tors that mediate antidiabetic metabolic effects[J].Nature, 2003,423:762-769.

[4]赵宏宇,李荣山,于为民,等.NLRP3炎性小体在高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞炎性反应中的变化[J].中国糖尿病杂志,2013,21（6）:558-561.

[5]Tao J,Scott E L M,Scott L,et al.Calorie Restriction Modu⁃lates Renal Expression of Sterol Regulatory Element Bind⁃ing Proteins,Lipid Accumulation,and Age-Related Renal Disease[J].J Am Soc Nephrol,2005,16:2385-2394.

[6]Eduardo J Lezcano,Pablo Inigo,Ana M Larraga,et al.Calor⁃ic restriction or telmisartan control dyslipidemia and ne⁃phropathy in obese diabetic Zücker rats[J].Diabetology& Metabolic Syndrome,2014,6:10-20.

[7]魏立静.脂联素对高糖环境下人肾小管上皮细胞凋亡及纤维化的影响[D].太原:山西医科大学,2013.

责任编辑：毕和平

Effects of Adiponectin on Content of Inflammatory Cytokines in NRK-52E Cells Cultured with High Glucose

YAO Maozhong1，CHEN Zhanjuan2*
（1.Research Center for Drug Safety Evaluation of Hainan Province，Hainan Medical University，Haikou 571199，China；2.School of Pharmaceutical Sciences,Hainan Medical University，Haikou 571199，China）

This paper investigated the effects of adiponectin（APN）on content of inflammatory cytokines in NRK-52E cells cultured with high glucose.NRK-52E cells cultured with high glucose were divided into control group and test groups（low dose group,middle dose group and high dose group）.APN content of culture solution for the 3 test groups were 5,10 and 20 mg/L,respectively.The content of TNF-α,IL-6 and IL-1βof supernatants of cultured NRK-52E cells in the 4 groups were detected after cell’s being cultured for 48 h.The results showed that contents of TNF-α,IL-6 and IL-1β were decreased by APN,the difference was significant（P<0.05 or P<0.01）.Conclusion:The contents of inflammatory cytokines in NRK-52E cells cultured with high glucose were decreased by APN.

APN；High glucose；NRK-52E cell；Inflammatory cytokines

Q 586

A

1674-4942（2015）03-0284-02

2015-06-29

*通讯作者