卢 红，王建军，周 芳

河南大学淮河医院肿瘤科开封475000

△女，1973年12月生，博士，副教授，副主任医师，研究方向:恶性肿瘤的综合治疗，E-mail:hhyyluhong@126．com

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)是细胞表面的受体酪氨酸激酶，能够与大量的生长因子如表皮生长因子和双调蛋白相互作用。磷酸化的EGFR(p－EGFR)能够激活不同的胞内信号途径，从而导致细胞增殖和存活［1］，因而EGFR 可能成为治疗这些肿瘤的分子靶点［2］。蛋白激酶(Akt)信号途径作为EGFR 调控的下游信号途径之一［3］，其激活主要体现在以下几个方面:Akt 的磷酸化、前凋亡蛋白BAD 的失活以及雄性激素受体转录活性的变化等［4－5］。目前，越来越多的研究［6－7］显示，p－EGFR 和磷酸化Akt(p－Akt)的过表达与肿瘤的增殖、存活及预后关系密切。作者采用免疫组化方法检测食管鳞癌组织和正常食管黏膜组织中p－EGFR 和p－Akt 蛋白的表达，分析其与食管鳞癌患者临床病理特征之间的关系，探讨二者在食管鳞癌中表达的相关性，为食管鳞癌恶性程度的预测提供新的理论依据。

1 材料与方法

1．1 组织标本 选取河南大学淮河医院2011年7月至2012年2月食管癌标本50例，均经病理学证实为食管鳞癌。每例标本于手术切除后40 min 内取癌组织及癌旁正常食管黏膜组织(距肿瘤边缘5～8 cm)，立即置于液氮中。患者中男31例，女19例。肿瘤直径＜3 cm 者15例，3～5 cm 者14例，＞5 cm 者21例。TNM 分期:Ⅱ期11例，Ⅲa 期13例，Ⅲb 期15例，Ⅳ期11例。分化程度:低分化27例，中分化13例，高分化10例。有淋巴结转移27例，无淋巴结转移23例。

1．2 p-EGFR 和p-Akt 蛋白表达的免疫组化检测将食管鳞癌及癌旁正常食管黏膜组织标本5 μm 厚连续切片，微波修复抗原，分别与一抗［兔抗人p－Akt(Ser 473)多克隆抗体为Abcam 公司产品，兔抗人p－EGFR(1173)多克隆抗体为Santa Cruz 公司产品］、二抗反应。DAB 显色，苏木素复染。结果判定:以胞质、胞膜或胞核出现黄色颗粒为阳性细胞。每张切片选5个高倍视野，计算每个视野阳性细胞百分率。阳性细胞百分率＜10% 为1 分，10%～50%为2 分，＞50%为3 分;按染色强弱评分:无黄色颗粒为0 分，淡黄色染色为1 分，中度黄色染色为2 分，棕黄色染色为3 分。然后按照2种评分的乘积计算总分，总分＜3 分为阴性，≥3 分为阳性。

1．3 统计学处理 采用SPSS 13．0 进行分析。应用配对资料的χ2检验比较食管鳞癌及癌旁正常食管组织中p－EGFR 和p－Akt 蛋白表达的差异，应用χ2检验分析p－EGFR 和p－Akt 蛋白的表达与食管鳞癌患者临床病理特征的关系，应用Pearson 相关分析食管鳞癌组织中两种蛋白表达的关系，检验水准α=0．05。

2 结果

2．1 食管鳞癌及癌旁正常食管组织中p-EGFR 和p-Akt 蛋白的表达 见图1 和表1、2。p－EGFR 蛋白阳性表达产物主要定位于细胞质或细胞膜。食管鳞癌组织中p－EGFR 蛋白阳性表达率为78% (39/50)，高于癌旁正常食管黏膜组织［40%(20/50)］。p－Akt 阳性表达产物主要定位于细胞质或细胞核，其在食管鳞癌组织中的阳性表达率为80% (40/50)，高于癌旁正常食管黏膜组织［6%(3/50)］。

图1 食管鳞癌及癌旁正常食管组织中p-EGFR(A)和p-Akt(B)蛋白的表达(SP，×400)

表1 食管鳞癌及癌旁正常食管组织中p-EGFR 蛋白表达的比较(n=50)例

表2 食管鳞癌及癌旁正常食管组织中p-Akt 蛋白表达的比较(n=50)例

2．2 p-EGFR 和p-Akt 蛋白的表达与食管鳞癌患者临床病理特征的关系 见表3。

表3 p-EGFR 和p-Akt 蛋白表达与食管鳞癌患者临床病理特征的关系

2．3 食管鳞癌组织中p-EGFR 和p-Akt 蛋白表达的关系 见表4。

表4 食管鳞癌组织中p-EGFR 和p-Akt 蛋白表达的关系例

3 讨论

当前分子靶向治疗作为一种新的肿瘤治疗的替代手段已经显示出极大的应用前景。采用EGFR 作为分子靶点开发出很多靶向药物，如吉非替尼［8］、埃罗替尼［9］、西妥昔单抗［10］等。Hiraishi 等［11］研究发现，口腔鳞癌组织中p－EGFR 和EGFR 蛋白表达的阳性率分别为98%(51/52)和92．3%(48/52)，并发现二者均与肿瘤分期和淋巴结转移无关，提示其高表达可能成为预测口腔鳞癌极好的分子标志之一。此外，胃肠道类癌和胰腺内分泌肿瘤中均检测出高水平的p－EGFR 和EGFR 蛋白的表达，且发现高表达p－EGFR 的胰腺内分泌肿瘤患者与低表达或不表达p－EGFR 的患者相比，其预后更差［12］，提示p－EGFR 在肿瘤的发生和预后中发挥重要的作用。为了进一步了解食管鳞癌组织中p－EGFR 蛋白的表达情况，作者采用免疫组化法分析食管鳞癌组织和癌旁正常食管黏膜组织中p－EGFR 蛋白的表达，发现食管癌组织中p－EGFR 表达的阳性率高于癌旁正常食管组织;进一步分析发现有淋巴结转移、分化程度低的食管鳞癌组织中p－EGFR 蛋白阳性表达率明显增高，提示EGFR 的磷酸化状态水平的高低可能与食管鳞癌的发生、发展关系密切，表明其可能成为判定食管鳞癌恶性程度的分子标志，但其确切的分子机制尚需要进一步探讨。

众所周知，大多数肿瘤并非由单一信号转导通路所支配，因此，多靶点治疗可能为肿瘤患者带来新的福音。EGFR 调控肿瘤细胞的增殖、存活和凋亡的过程主要依赖以下3 条信号途径:①Ras/Raf/MAPK 信号途径。②PI3K/Akt 信号途径。③STAT信号途径。其中PI3K/Akt 信号途径占有重要的地位。Akt 的磷酸化状态水平的高低与肿瘤(急性淋巴细胞性白血病［13］、肾癌［14］和前列腺癌［15］)的恶性程度密切相关。因此，作者也分析了食管鳞癌组织中p－Akt 蛋白的表达情况，结果显示，食管鳞癌组织中p－Akt 蛋白表达的阳性率高于癌旁正常食管黏膜组织;进一步分析发现其与食管鳞癌患者临床病理学参数之间的关系与p－EGFR 蛋白具有一致性。此外，作者还发现二者在食管鳞癌组织中的表达呈正关联，表明二者有协同作用，共同调控食管鳞癌细胞的增殖和存活。

总之，作者的研究结果表明，食管鳞癌组织中存在p－EGFR 和p－Akt 的高表达，其高表达与食管鳞癌的分化程度和淋巴结转移密切相关，并且在食管鳞癌中其表达呈正相关，因而联合检测食管鳞癌中p－EGFR 和p－Akt 的水平对食管鳞癌恶性程度的预测具有一定价值。

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