傅祝英杰，吴 湜，郭 燕，马 莹，杨 洋，胡付品，朱德妹，刘 杨，徐晓刚

金黄色葡萄球菌（金葡菌）可导致血流感染、心内膜炎等危及生命的重症感染，是临床重要致病菌［1］。磷霉素联合其他抗菌药物是治疗金葡菌感染的常用方案，但随着磷霉素的广泛应用，金葡菌磷霉素耐药问题也日益凸显。近年国内监测资料显示，金葡菌对磷霉素耐药率已达30%左右［2-3］。此前，我们报道了磷霉素耐药基因fosB 在金葡菌中的分布［4］，同时发现多数磷霉素耐药金葡菌并不携带fosB 基因，提示可能存在其他耐药机制。大肠埃希菌中磷霉素靶位蛋白基因（murA）及磷霉素转运蛋白基因（glpT、uhpT）变异可导致磷霉素耐药，然而，在磷霉素耐药金葡菌中是否存在此类机制尚未见报道。本研究拟通过对临床分离磷霉素耐药金葡菌的murA、glpT 及uhpT 进行序列分析，了解这些基因变异在金葡菌磷霉素耐药性形成中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株收集 2014年1—3 月复旦大学附属华山医院就诊患者临床分离的金葡菌（已剔除同一患者分离的重复菌株），经菌种纯化分离及23S rRNA 测序再鉴定，获得磷霉素耐药金葡菌44株，并收集了6株同期磷霉素敏感株作为对照菌株。

1.1.2 主要试剂Columbia 琼脂培 养基及Mueller Hinton琼脂培养基为英国OXOID 公司产品；磷霉素等抗菌药物标准品购自上海东方药品科技实业有限公司；6-磷酸葡萄糖购自Sigma公司；引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成；琼脂糖为美国Bio-Rad 公司产品；聚合酶链反应（PCR）试剂为日本TaKaRa公司产品。

1.2 方法

1.2.1 药敏测定 参照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）2013推荐的琼脂稀释法测定磷霉素对金葡菌的最低抑菌浓度（MIC），测定磷霉素MIC 时琼脂培养基中含25 mg／L 的6-磷酸葡萄糖［5］。……