陈 欢，陈 宏，廖宁馨，陈江汉

中枢神经系统真菌感染中以隐球菌性脑膜炎（隐脑）最为常见，其致病菌为新生隐球菌和格特隐球菌，我国以新生隐球菌感染为主，格特隐球菌感染少见。流行病学显示我国的大部分隐球菌病患者发生在“免疫功能正常”的人群，患有人类免疫缺陷综合征（AIDS）／人类免疫缺陷病毒感染的患者仅占六分之一［1］，这类“免疫功能正常”隐脑患者临床治疗困难，治疗不良反应大，耗时长，病死率高，预后较差［2］。随着高效抗反转录病毒治疗的应用，艾滋病相关隐脑的发病率已显著下降，而非艾滋病相关隐脑的发病率却呈逐年上升趋势［3］。探索“免疫功能正常”隐脑患者内在的发病机制，对这类患者的临床治疗显得尤为重要。我们通过观察并分析微小RNA-146a-5p（miR-146a-5p）在新生隐球菌、脂多糖（LPS）刺激THP-1细胞中表达的差异，为探讨miR-146a-5p在新生隐球菌所致隐脑中的调控作用及机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

人单核细胞系THP-1购于中国科学院细胞库，新生隐球菌（标准株WM148）来源于上海长征医院皮肤真菌保藏实验室，LPS 购自美国Sigma 公司；RPMI-1640培养基、胎牛血清购自美国Gibco 公司，人肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6购于美国ebioscience；TRIzol购于美国Invitrogen；TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit、TaqMan Universal PCR Master Mix、Taq-Man MicroRNA Assays购于大连TaKaRa公司）；氯仿、异丙醇及无水乙醇等均为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 人单核细胞系THP-1培养于含10%的胎牛血清、100 u／mL 青霉素、100 u／mL 链霉素，细胞置于37℃、5% CO2、饱和湿度的培养箱中培养；每2～3天更换培养液1次，细胞密度适度时常规传代培养。

1.2.2 细胞处理及分组 将THP-1细胞按1×106个／mL接种于六孔板，每孔2 mL。……