曲衍洪，田 琳，李玉梅，李 强，方嘉碧，宋冬雪，王佳佳，郝大可，陈中合

（1.济南大学 化学化工学院，山东济南 250022；2.中海沥青股份有限公司，山东 滨州 256601；3.济南大学 生物科学与技术学院，山东 济南 250022）

环氧丙烷皂化废水活性污泥DNA提取方法的比较与优化

曲衍洪1，田 琳2，李玉梅3，李 强3，方嘉碧3，宋冬雪3，王佳佳1，郝大可3，陈中合1

（1.济南大学 化学化工学院，山东济南 250022；2.中海沥青股份有限公司，山东 滨州 256601；3.济南大学 生物科学与技术学院，山东 济南 250022）

探索适宜的环氧丙烷废水中活性污泥微生物总DNA提取的方法并进行优化。采用11种方法提取环氧丙烷废水中活性污泥微生物总DNA，即NaCl溶液-提取缓冲液-溶菌酶-十二烷基磺酸钠（SDS）法、蛋白酶K-SDS法、SDS-反复冻融法、Tris-EDTA-NaCl-聚乙烯吡咯烷酮（PVP）（TENP）法和反复冻融-SDS-蛋白酶K法等。通过对这11种方法进行比较，以确定最佳试验方案并结合单因素法对最佳方案进行优化。琼脂糖凝胶电泳结果显示：NaCl溶液-提取缓冲液-溶菌酶-SDS法提取DNA亮度高，有大片断DNA的存在且拖带较少，条带集中；酶法所提取的DNA效果仅次于提取缓冲液-溶菌酶-SDS法，其他方案没有提取出DNA。单因子试验结果表明：10 mg/mL溶菌酶，100 g/LSDS，反应时间为30 min，反应温度为45℃时效果最佳。NaCl溶液-提取缓冲液-溶菌酶-SDS提取法为环氧丙烷废水中微生物群落在分子水平上的研究提供了一种简便、可靠的DNA提取方法。

活性污泥；环氧丙烷；DNA提取；废水

活性污泥是由以好氧性细菌为主体的微生物和水中的悬浮物质、胶体物质混杂在一起形成的肉眼可见的絮状颗粒，它是废水生物处理过程的主体［1］。……