河南汉族人群16个Y-SNP位点遗传多态性

2015-08-27孙许朋杨世平武红艳郭娟宁岳俊涛樊爱英

法医学杂志 2015年1期

孙许朋，杨世平，武红艳，郭娟宁，岳俊涛，樊爱英

（1.新乡医学院法医学系，河南新乡 453003；2.许昌市公安局犯罪侦查支队，河南许昌 461000）

Y染色体呈父系遗传，不易受重组和回复突变的影响，在涉及性犯罪、追溯父系同代、隔代亲权鉴定等方面具有应用价值。本研究对河南汉族人群16个YSNP位点的多态性进行调查，旨在为法医学应用和群体进化研究提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 样本收集与位点选择

收集由许昌市公安局犯罪侦查支队提供的176份河南地区汉族男性无关个体血样。常规Chelex-100法提取基因组DNA，-20℃保存备用。

根据国际Y染色体协会提出的系统树[1]，挑选在东亚群体中多态性较好的16个Y-SNP位点（M9、M89、M95、M119、M122、M214、P136、P148、P164、P191、P196、P197、P198、P199、P200、P201）。用 Primer Premier 5.0软件自行设计PCR扩增引物和SNaPshot微测序引物，由大连宝生物有限公司合成，引物序列见表1。

表1 16个Y-SNP位点的引物序列和SNaPshot微测序引物

1.2 扩增

分别对男性DNA样本的16个Y-SNP位点进行单独扩增以验证其准确性，PCR扩增体系为25 μL，包括：1×PCR 缓冲液、200 μmol/L dNTPs、2.0 mmol/L MgCl2、1U AmpliTaq Gold®DNA聚合酶。扩增条件：94℃ 11 min；94℃ 60 s，62 ℃ 60 s，72 ℃ 60 s，32 个循环；72℃ 15min。

1.3 SNaPshot微测序

SNaPshot微测序反应前取1.5 μL PCR产物，加入0.5 U虾碱性磷酸酶 1 U/μL，2 U核酸外切酶Ⅰ（Exo-Ⅰ） 10U/μL，置入 2720型扩增仪（美国 AB 公司）进行反应，37℃孵化60min，80℃灭活15min。

SNaPshot微测序采用5μL反应体系，内含1.5μL SNaPshot反应混合液，1.5 μL纯化后的PCR产物和1μL单碱基延伸引物。循环条件：96℃ 10s，50℃ 5s，60℃ 30s，共25个循环。向SNaPshot微测序反应的产物中加入1 U虾碱性磷酸酶（1 U/μL），37℃孵化60min，80℃变性 15min。